中华人民共和国国家标准
GB/T30706-2014
Measurment method and evaluating of the antibacterial characteristicsofphotocatalysis materials under visible light irridation
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由中国建筑材料联合会提出.
本标准由全国工业陶瓷标准化技术委员会（SAC/TC194）归口.
本标准的起草单位：中国科学院理化技术研究所、北京中铁德成喷砖技术开发有限公司、广东省微生物分析检测中心、广州工业微生物检测中心、北京英特雅光高科技有限公司.
本标准的主要起草人：郑苏江、只金芳、白振宏、黎婉园、于建强、高月红.
可见光照射下光催化抗菌材料及制品 抗菌性能测试方法及评价
1范围
本标准规定了可见光响应的光催化抗菌材料及制品的抗菌性能的术语和定义、抗菌性能测试方法和评价.
瓷、塑料、涂层、不透水的织物等. 本标准适用于在可见光光照激发下产生抗菌性能的光催化抗菌材料及制品，其材质可以为玻璃、陶
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3测试方法
警告
微生物生长试验会危害人体健康，试验操作人员应经过微生物学培训并遵守实验室生物安全通用要求的规定.
3.1一般规定
本标准所用试剂和水，除微生物学试剂应满足微生物学要求外，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水.
3.2设备
3.2.1光源
荧光灯，色温3800K~6500K，显色指数大于90%，波长分布在400nm~780nm，注意使用时应滤除紫外波段.推荐用色温为5000K的荧光灯（D50）.
3.2.2照度计
配有400nm~780nm段传感器.
3.2.3紫外截止滤光片
滤除小于400nm的紫外光，效率应不低于80%.
GB/T 30706-2014
3.3菌种、培养基和试剂
3.3.1菌种
3.3.1.1大肠埃希氏菌（Escherichia coli） AS 1.90
3.3.1.2金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus） AS1.89 等同 ATCC 6538p
根据产品的使用要求，也可选用其他菌种作为测试菌种，但所用菌种应满足本标准并可溯源.注：AS为中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）的菌种编号.
3.3.2营养肉汤（NB）
牛肉膏3.0g，蛋白陈10.0g，氯化钠5.0g：加蒸馏水1000mL溶解（需加热）后，室温下用15 min.
灭菌后的营养肉汤应在5℃～10℃下保存.保存期不超过30天.
3.3.3营养琼脂（NA）
牛肉膏5.0g，蛋白陈10.0g，氯化钠5.0g，琼脂15.0g；加蒸馏水1000mL溶解（需加热）后，室温下用0.1mol/1.的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节其pH至7.0~7.2；置于121℃下高压湿热灭菌 15 min.
灭菌后的营养琼脂应在5℃～10℃下保存.保存期不超过30天.
3.3.4平板计数琼脂
酵母粉2.5g，胰蛋白陈5.0g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g；加蒸馏水1000mL溶解（需加热）后，室温下用0.1mol/L的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节其pH至7.0~7.2:置于121C下高压湿热灭菌 15 min.
灭菌后的平板计数琼脂应在5℃～10℃下保存，保存期不超过30天.
3.3.5磷酸盐缓冲（PBS.0.06mol/L）生理盐水洗脱液
磷酸二氢钾2.7g，磷酸氢二钾7.0g，氯化钠8.5g.加蒸馏水至1000mL溶解.为便于细菌洗脱，可加入少量表面活性剂如吐温一80.置于121℃下高压湿热灭菌15min.
灭菌后的洗脱液应在5℃～10C下保存.保存期不超过30天.
3.4操作步骤
3.4.1菌种保藏
将标准菌种用接种环接种在营养琼脂（NA)斜面培养基或其他适合的培养基上，置于培养箱中，在此类推），但接种次数从菌种保藏中心得到的细菌算起不应超过14代.如保存时间达到或超过30天，不可进行继代培养.
3.4.2菌种的活化
将斜面保藏菌转接到NA平板或斜面培养基上，置于培养箱中，在37C士1℃下培养24h士1h，
GB/T 30706-2014
的新鲜细菌培养物.
3.4.3接种菌液的制备
用于大肠杆菌菌悬液配制的NB为500倍水稀释液（即0.2%NB），用于金黄色葡萄球菌菌悬液配制的NB为100倍水稀释液（即1%NB）.室湿下用0.1mol/L的氢氧化钠或0.1mol/L的盐酸溶液调节其pH至7.0~7.2：为便于细菌分散可加人少量中性表面活性剂（如1%吐温一80）.
用接种环从活化好的新鲜细菌培养物上取少量新鲜细菌，加到上述稀释液中，依次10倍梯度稀释，选取菌液浓度为（5~20）×10CFU/mL的梯度作为测试用菌液.
若配好的接种液不立刻使用，则应在4C下保存，4h内使用.
3.4.4样片制备
3.4.4.1标准空白对照样
采用医用级聚乙烯（PE）制成的试样，标准尺寸为（50土2）mm×（50土2）mm，厚度1mm~10mm左右.准备9片，其中3片用于0时间洗脱，3片用于明条件测试，3片用于暗条件测试.
3.4.4.2光催化试样
从制品或材料上选取平整的部分，按步骤3.4.4.1中的标准尺寸准备6片，3片用于明条件测试，3片用于暗条件测试.
3.4.4.3测试用膜
较小，可相应减少膜的尺寸，并适当减少接种菌液量，取0.1mL~0.4mL均可，但必须使贴膜后材料表 采用医用级PE制成，标准尺寸为（40土2）mm×（40±2）mm，厚度0.02mm~0.1mm；若样片尺寸面的菌液符合6.2×10²CFU/cm²~2.5×10CFU/cm²
3.4.4.4试样、膜的清洁
用脱脂棉蘸消毒酒精擦拭上述试样、膜2～3次，充分干燥待用.若试样不适合用酒精擦拭，也可采用其他适合的方法清洁（如无菌水擦拭后，置紫外灯下照射）.
对于光催化试样，采用不低于1.0mW/cm²的紫外（UVC，主波长在273.8nm）灯照射4h~24h来清洁样片表面：然后静置不低于2h，允许开始测试.
3.4.5接种
3.4.3制得的接种液滴加到每个试样的表面，小心地用薄膜覆盖，调节薄膜使菌液分散均匀.注意不应 将步骤3.4.4中的各个试样分别故人洁净的平Ⅲ中，测试面朝上.用移液管准确量取0.2mL步骤将菌液溢出酒落，否则测试无效.
对于织物试样，将薄膜置于样品下方，然后滴加菌液到样品上.
3.4.6培养
打开荧光灯（D65或D50），稳定0.5h以上，然后调节荧光灯高度或功率来调节光照强度，采用照度计测量（用滤光片滤去波长小于400nm的光后测量），记录测试用光照强度（300~2500）（勒克斯，1x），偏差不超过2%.测试中，通过在传感器前置一平Ⅲ上盖和膜来测定光照强度，用来表示测试实际到达
