ICS65.020.20 B61 LY 中华人民共和国林业行业标准 LY/T2305-2014 油茶品种微卫星标记鉴别技术规程 Technical regulations of Camellia varieties identification by SSR markers 2014-08-21发布 2014-12-01实施 国家林业局发布 LY/T2305-2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家林业局提出. 本标准由全国林木种子标准化技术委员会(SAC/TC115)归口. 本标准负责起草单位：南京林业大学. 本标准参加起草单位：湖北省林业科学研究院、福建省林木种苗总站. 本标准主要起草人：尹佟明、戴晓港、陈赢男、李淑娴、史洁、张新叶、陈伟. I LY/T2305-2014 油茶品种微卫星标记鉴别技术规程 1范围 本标准规定了以油茶(Camellia spp.)幼嫩组织（叶片、芽等）为材料，利用微卫星标记法对油茶品 种进行分子鉴定的术语、原理、主要仪器和设备、试剂与溶液、操作程序和鉴定. 本标准适用于附录A中所列油茶品种的鉴别. 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 2.1 微卫星microsatellite 简单重复序列simple sequence repeats;SSR 也称基因组中由2个~6个核苷酸组成的DNΛ串联重复序列. 2.2 基因型频率genotype frequency 群体中某一位点特定基因型个体数占全部个体数的比率. 3原理 微卫星广泛分布于植物基因组的不同位置，微卫星位点具有高度的遗传多态性，微卫星标记其有高 度的物种特异性和良好的扩增重现性，是用于植物品种遗传鉴别的首选标记.本标准采用高通量测序 获得了大量微卫星标记，通过实验检测，筛选了10对高度多态性的微卫星标记，用于油茶品种的遗传鉴 别.在检验过程中，我们可采用真实品种的DA模板做为标准品，从待检苗木中抽样做为待检样品. 利用微卫星引物进行扩增时，若待检样品与标准品在任一引物扩增位点上基因型不同，则可判定待检样 品与标准品不是同一品种.当不同引物扩增位点上基因型都相同时，可根据标准品种在不同位点上的 基因型频率乘积，计算出待检样品与标准品是同一品种的概率. 4主要仪器和设备 4.1PCR扩增仪. 4.2离心机12000r/min 4.3微量可调移液器(2L、10aL、100μL、1000uL). 4.4EPS-300数显式稳压稳流电泳仪（电压10V~300V 电流10mA~400mA). 4.5全自动数码凝胶图像分析系统（透射紫外波长：302nm 透射紫外面积：20cmX20cm). 4.6微量核酸蛋白检测仪（波长范围：190nm~840nm 波长精度1nm 检测范围2ng/uL~ 15000ng/uL). 1 ...
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