T/GXAS
T/GXAS970-2025
Universal detection of caprine /ovine enterovirus by real-timefluorescentquantitativeRT-PCR
广西标准化协会 发布
前言
本文件参照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由广西兽医协会提出、归口并宣贯.
本文件起草单位：广西悦牧生物科技有限公司、防城港市动物疫病预防控制中心、广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、广西农业职业技术大学.
宋星桔、韦成威、陆春礼、苏文广、苏子庭、刘胜平、梁风、吕思明、周媛、侯慧贤、韦芳、陈秋英、 本文件主要起草人：莫模双、谢守玉、张红云、周明旭、黄张玲、杨丽雪、汤迪沔、欧莹、罗湘尹、黄百花、陆海、何晓霞、王露霞、覃海、袁成进、梁星雪、胡艳、段辰星、装幸彪、曹显永、杨纯兴、肖永祖、王德玺、樊友净、黄景灿、马麟、郑翔、孙晓琳、何凤愿、卢华闪、韦文飞、熊嘉雪、蓝鑫婷、 利茵、吴万佳、蒋大平、熊毅.
通用型羊肠道病毒的检测实时荧光定量RT-PCR法
1范围
材料、仪器设备、试验步骤技术要求. 本文件界定了通用型羊肠道病毒的检测实时荧光定量RT-PCR法涉及的术语和定义、原理、试剂和
本文件适用于采用实时荧光定量RT-PCR法对羊肠道病毒核酸的检测.
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
临床上引起山羊或绵羊呼吸道、消化道疾病以及神经系统紊乱的微核糖核酸病毒科肠道病毒属成员. 山羊/绵羊肠道病毒caprine/ovineenterovirus，CEV/OEV注：肠道病毒属分为12个肠道病毒种（A一L)，其中绵羊多为G5和G7亚型，山羊多为G20亚型.
荧光报告基团reporter
在一定的激发条件下，用于监测生物体系中的分子活性、物质变化等的一种特殊的化学物质.
荧光淬灭基团black hole quencher，BHQ
通过吸收荧光基团的光能，将其转化为热能或其他形式的能量，从而使荧光基团无法发光的一种能够抑制荧光发射的化合物.
实时荧光定量RT-PCRreal-timefluorescent quantitative RT-PCR，qRT-PCR
通过检测PCR反应过程中释放的荧光信号来定量检测目标核酸含量的一种分子生物学技术.
6-骏基荧光素6-carboxyfluorescein，FAM
一种主要用于核酸检测和标记的羧基荧光素同分异构体.
3.6Ct值 cycle threshold， Ct
检测到靶序列的荧光信号达到设定的阔值所经历的PCR循环数.
下列缩略语适用于本文件.EDTA:乙二胺四乙酸（Ethylene diamine tetraacetic acid），LB: LuriaBertani . PCR：聚合离链式反应（Polymerase chainreaction）.PBS:磷酸盐缓冲液（Phosphate buffered solution）.
5原理
探针5端标记一个荧光报告基团，3端标记一个荧光淬灭基团.当PCR扩增时，探针被酶切降解，使荧光 根据CEV/OEV基因组序列共同保守片段，设计合成一对特异性引物和一条特异性的荧光双标记探针.
