SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1048--2002 进出口粮食、饲料 大麦品种鉴定 蛋白质电泳分析法 Cereals and feedstuffs for import and export --Identificationforbarleyvariety- Methodofproteinelectrophoresis 2002-01-16发布 2002-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 进出口粮食、饲料 大麦品种鉴定蛋白质电泳分析法 SN/T 1048-2002 Cereals and feedstuffs for import and export --Identification for barleyvariety- Method ofprotein electrophoresis 1范围 本标准规定了进出口大麦品种鉴定的方法。
本标准适用于进出口大麦品种的鉴定。
2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均 为有效。
标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
SN/T0798-1999进出口粮油饲料检验检验名词术语 SN/T0800.1-1999进出口粮油饲料检验抽样和制样方法 3定义 除按照SN/T0798中的定义执行外，本标准还采用下列定义。
3.1品种variety 在长期自然选择下生长的或经过人工培育出的作物的不同裁培种。
3.2品种鉴定variety identification 用物理的或化学的方法区分作物的不同品种。
3.3醇溶蛋白质hordeins 种子中溶解于醇类的、能用含有醇类的缓冲液提取的一组储藏蛋白质。
作物不同品种的种子内所含 醇溶蛋白各组分不一样，各组分蛋白质受不同的基因所编码。
4抽样和制样 按照SN/T0800.1中规定的方法执行。
5检验 5.1原理 大麦的醇溶蛋白通过垂直平板电泳能有效地分离，经银染后得到电泳图谱，各种大麦的醇溶蛋白电 泳图谱是品种的固有特性，对其进行比较分析可以鉴定大麦品种。
5.2试剂 实验用试剂均为分析纯；除特别说明外，实验用水为蒸馏水或相应的去离子水。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-01-16批准 2002-06-01实施 1
SN/T 1048-2002 5.3.1垂直平板电泳系统。
5.3.2台式离心机最高转速16000r/min。
5.3.3离心管通常使用1.5mI.聚丙烯塑料离心管。
5.3.4凝胶成像系统。
5.3.5水浴锅。
5.3.6微量加样器：0.5μL~2.5pL，2μL~20pL，10μL~100μL,200μL~1000μL。
5.4试验方法 5.4.1大麦醇溶蛋白质的提取 5.4.1.1取颗粒饱满、外观、色泽、气味正常的单粒大麦，将麦粒用滤纸包裹住、压碎麦粒至粉末状。
5.4.1.2将粉碎的麦粒完全移人1.5mL的离心管内。
5.4.1.3向离心管内加人500uL提取溶液，振荡2min，在60C水浴中加热30min，8800r/min离心 10 min。
1min，在60C水浴中加热15min。
5.4.1.5加人100μL含有溴酚蓝的样品缓冲液，振荡1min。
抽提液在室温下可保存2d～3d。
5.4.2制备分离胶和浓缩胶 5.4.2.1制备分离胶 根据电泳平板的大小确定灌胶量，各种溶液的用量可按下列比例进行调整。
取9.60mL25%丙烯 酰胺溶液，7.18mL重蒸馏水，3.00mL分离胶缓冲液，抽气2min，加人24pLTEMED，最后加入224 μL1%过硫酸铵溶液。
将以上溶液充分混匀后迅速灌注到制胶模板中，灌注的分离胶溶液高度以距插人 的梳子齿下方1cm处为宜，用双蒸水将分离胶溶液表面铺满，聚合1h。
倒出分离胶表面的重蒸馏水，沥 干；加人少量的浓缩胶缓冲液清洗分离胶表面，沥干。
5.4.2.2制备浓缩胶 取2.40mL25%丙烯酰胺溶液，6.96mL重蒸馏水，400μL浓缩胶缓冲液，抽气2min，加人15pl. TEMED和240uL1%过硫酸铵溶液，将以上溶液充分混匀。
将样品梳插人模板中，将充分混匀的浓缩 胶溶液加人分离胶上部的模板中，浓缩胶溶液聚合45min。
5.4.3加样 待浓缩胶溶液聚合后，垂直向上移去样品梳，并用上槽缓冲液冲洗。
分别向上槽和下槽中加入上槽 缓冲液和下槽缓冲液。
用微量加样器加入低分子量标准蛋白质溶液，作为蛋白质的分子量标记；加人1.0pL大麦标准样 品的提取液，作为对照。
加1.0μL待...
