SC
中华人民共和国水产行业标准
虾类传染性早熟病毒感染诊断方法
Diagnostic methods for infection with infectious precocity virus of prawn
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部渔业渔政管理局提出.
虾类传染性早熟病毒感染诊断方法
1范围
本文件描述了虾类传染性早熟病毒感染诊断的试剂和材料、仅器设备、临床症状、样品，以及组织病理学检测、原位杂交检测、套式RT-PCR检测、RT-gPCR检测、RT-LAMP检测和综合判定的方法.
本文件适用于虾类传染性早熟病毒感染的流行病学调查、诊断、检疫和监测.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T28630.4-2012白斑综合征（WSD）诊断规程第4部分：组织病理学诊断法GB/T40257-2021桃拉综合征诊断规程RT-PCR检测法SC/T7011.2水生动物疾病术语与命名规则第2部分：水生动物疾病命名规则
3术语和定义
SC/T7011.1和SC/T7011.2界定的术语和定义适用于本文件.
4缩略语
下列缩略语适用于本文件.AMV：禽类成髓细胞瘤病毒（avian myeloblastosis virus）AP:碱性磷酸醇 (alkaline phosphatase)BCIP:5-溴-4氯-3-呵哚磷酸甲苯铵盐(5-bromo-4-chloro-3-indoly1 phosphate p-toluidine salt) bp:碱基对(base pair)Cr值：阔值循环数，即荧光信号达到设定的网值时所经历的循环数（cycle-thresholdvalue）DEPC：焦碳酸二乙酯（diethylpyrocarbonate)DIG：地高辛（digoxigenin） DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleic acid)dNTPs：脱氧核糖核书三磷酸（deoxy-ribonucleoside triphosphate）EDTA：乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraacetie acid)IPV:传染性早熟病毒（infectious precocityvirus)M-MLV：莫洛尼鼠白血病病毒（moloney-murine leukemia virus) NBT：氯化硝基四氮唑蓝（4-nitro blue tetrazolium chloride)PBS：磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffered saline)PBST:含 Tween-20 的磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffered saline with Tween-20)RT-LAMP：逆转录环介导等温扩增（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification） RNA：核糖核酸（ribonucleic acid)RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription polymerase chain reaction）RT-qPCR：实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（reverse transcription quantitative real-time poly-merase chain reaction)
SSC：柠橡酸钠缓冲液（saline sodium citrate)
SC/T 7244-2025Tag ：水生栖热菌（Thermus aquatics）Tris：三羟甲基氨基甲烷（tris hydroxymethyl aminomethane)tRNA:转运 RNA(transfer RNA)5试剂和材料除非另有说明，在分析中仅适用确认为蒸馏水或去离子水或相当纯度的水，5.1二甲苯：分析纯.5.2无水乙醇：分析纯.5.395%乙醇：分析纯. 5.4石蜡（熔点52℃~54C）：切片级.5.5中性树胶：生化试剂.5.6琼脂糖：生化试剂.5.7RNA保存液：生化试剂.5.8DEPC水；按附录A中的A.1配制.5.94%多聚甲醛固定液：按A.2配制.5.1085%乙醇：按A.3配制.5.1180%乙醇：按A.4配制. 5.1275%乙醇：按A.5配制.5.1370%乙醇：按A.6配制.5.1450%乙醇：按A.7配制.5.15苏木精染色液：生化试剂.5.16伊红-焰红染色液：按A.8配制.5.17原位杂交探针：用地高辛标记套式PCR第二步扩增的目标序列作为原位杂交的探针，序列见附录5.18组织病理学和原位杂交检测阳性对照为感染IPV且有明显病理变化的罗氏沼虾复眼组织切片. B中的B.1.合成时用DIG标记的核糖核苷尿嘧啶代替脱氧核糖核苷胸腺嘧啶残基.5.19组织病理学和原位杂交检测阴性对照为未感染IPV的正常罗氏沼虾复眼组织切片.5.20蛋白酶K（20μg/mL）：按A.9配制.5.211×PBST:按A.10配制.5.22HC1(0. 2 mol/1)：按A.11 配制.5.23无1RNA无肝素预杂交液：按A.12配制.5.24tRNA(5 mg/mL):按 A. 13 配制.5.25肝素（5mg/mL）:按A.14配制. 5.26预杂交液：按A.15配制.5.271×马来酸：按A.16配制.5. 2810% Blocking Reagent:按 A. 17 配制.5. 29 Blocking Buffer:按 A. 18 配制.5.302×SSC：按A.19 配制.5.310.2×SSC：按A.20配制.5.32AP-抗 DIG(0.75 U/mL)：按A.21 配制.5.331XAP反应缓冲液：生化试剂.5.34BCIP/NBT显色液：按A.22配制. 2
