中华人民共和国国家标准
GB/T 28062-2025代替GB/T28062-2011
柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测 技术规程
Code ofpractice for detection of Candidatus Liberibacter asiaticusby quantitative real-time PCR
国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
相比，除结构调整和编辑性改动外，主要技术变化如下： 本文件代替GB/T28062-2011《柑桔黄龙病菌实时荧光PCR检测方法》，与GB/T28062-2011
更改了黄龙病样本的取样方法（见9.1.2011年版的8.2）：更改了阳性对照的Ct值规定（见11.3.2 2011年版的10.2.2）；将韧皮部杆菌亚洲种的荧光染料法检测引物CQULasF04/CQULasR04更改成特异性更高的CLas-4G/HLBr(5'-AGTCGAGCGCGTATGCGAAT-3′/5'-GCGTTATCCCGTAGAAAAA GGTAG-3'），并增加了荧光标记探针HLBp（序列为5'-AGACGGGTGAGTAACGCG-3'）（见10.1 2011年版的F.1.1）；增加了靶标韧皮部杆菌亚洲种核苷酸还原酶β基因（ardB基因）的实时荧光PCR检测（见11.3.3）.请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口.本文件起草单位：全国农业技术推广服务中心、华南农业大学、西南大学相桔研究所.本文件主要起草人：冯晓东、陈冉冉、邓晓玲、郑正、王雪峰、周常勇.本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为： 2011年首次发布为GB/T28062-2011；本次为第一次修订.
柑橘黄龙病菌实时荧光定量PCR检测 技术规程
1范围
本文件确立了柑橘黄龙病病原韧皮部杆菌亚洲种（CandidatusLiberibacter asiaticus）实时荧光定量PCR检测程序，规定了实验室设置、样品采集与处理、检测操作方法和结果判定，描述了证实方法.
本文件适用于对黄龙病寄主植物和传病媒介柑橘木氨中韧皮部杆菌亚洲种的实时荧光定量PCR检测和病害鉴定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB5040柑桔苗木产地检疫规程
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
柑橘黄龙病CitrusHuanglongbing
注：韧皮部杆菌属原核生物、o-变形菌纲、根瘤菌目（Rhizobinles）、根瘤菌科（Rhizobiareae），韧皮部杆菌属美的钢皮部秆菌美黄种 Candidarus 1iberibacter americanus
由韧皮部杆菌CandidatusLiberibacter spp.引起的植物检疫性病害，对柑橘生产造成巨大损失.
Liberibacter，是一种难培养革兰氏阴性细菌，分为3个种：分布于亚洲、非洲及美洲的韧皮部杆菌亚洲种Cendi darins Liheribacter asiaticus;分布于非洲的韧皮部杆菌非洲种 Candidatas Liberibacter africanus 以及分布于南
3.2
实时荧光定量PCRquantitativereal-timePCR
在体外扩增微量DNA片段的方法在扩增过程中由于荧光物质的释放或荧光物质与扩增产物结合而释放荧光信号，通过对荧光信号积累的实时监测来实现对起始模板中的靶标DNA的定量分析.
Ct值cycle threshold value
实时荧光PCR反应中每个反应管内荧光信号达到设定阔值时所经历的循环数.
4方法原理
本文件采用的实时荧光定量PCR检测包括了荧光染料法和荧光探针法两种检测方法.荧光染料法是利用黄龙病菌特有DNA序列设计引物，在PCR扩增时加人荧光染料，荧光染料与扩增形成的产
