中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4722-2025
桂花中苯乙醇苷类化合物的测定 高效液相色谱法
Determination of phenylethanoid glycosides in Osmanthus Fragrans Lour.flowers byhigh performance liquid chromatography
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出.
本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口.
本文件起草单位：浙江大学、中国计量大学、湖南农业大学、浙江中医药大学、江苏省农业科学院、黄山华绿园生物科技有限公司、杭州花凝香生物科技有限公司.
本文件主要起草人：陆柏益、朱宇航、黄伟素、周菲、李脉泉、夏道宗、焦琳舒、陈克、张大勇.
桂花中苯乙醇苷类化合物的测定高效液相色谱法
1范围
本文件描述了桂花中苯乙醇昔类化合物的高效液相色谱测定方法. 本文件适用于桂花中毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷、红景天苷和连翘酯昔A含量的测定.毛蕊花糖苷的标准曲线线性范围为1.0μg/mL～200μg/mL，异毛蕊花糖苷、红景天苷和连翘酯苷A的标准曲线线性范围为0.5μg/mL~200μg/ml.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
管阵列检测器在285nm波长下检测，以色谱峰的保留时间定性，外标法定量. 桂花中的苯乙醇苷类化合物，经80%乙醇水溶液超声提取，用高效液相色谱仪经紫外检测器或二极
5试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲醇（CHOH）.5.1.2乙醇（CHCHOH）.5.1.3乙酸（CH COOH）.5.1.4乙晴（CHCN)：色谱纯.
5.2溶液配制
5.2.10.1%乙酸水溶液：准确吸取1.0mL乙酸（5.1.3），加水定容至1000mL.混匀.5.2.250%甲醇水溶液；准确吸取50mL甲醇(5.1.1)，加水定容至100mL，混匀.5.2.380%乙醇水溶液：准确吸取80mL乙醇（5.1.2）.加水定容至100mL，混匀.
5.3标准品
5.3.1毛蕊花糖苷（Acteoside，CHO，CAS号：61276-17-3）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.5.3.2异毛蕊花糖苷（Isoacteoside，CHO；，CAS号：61303-13-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.5.3.3红景天苷（Salidroside，CHOCAS号：10338-51-9）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
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5.3.4连翘酯苷A（ForsythosideA，CHO，CAS号：79916-77-1)：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
5.4标准溶液配制
5.4.1标准储备溶液（10mg/mL）：分别准确称取苯乙醇苷标准品50mg（精确至0.1mg），用50%甲醇 水溶液（5.2.2）溶解并定容至5mL棕色容量瓶中，配制成浓度为10mg/mL标准储备溶液，于-18C保存，有效期2个月.5.4.2标准中间溶液（1mg/mL）：分别移取1mL标准储备溶液（5.4.1）于4个10mL棕色容量瓶中.用50%甲醇水溶液（5.2.2）定容至刻度，配制成浓度为1mg/mL标准中间溶液，现用现配.5.4.3混合标准工作溶液：分别移取0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL的标准中间溶液 （5.4.2）混合于10mL棕色容量瓶中，用50%甲醇水溶液（5.2.2）定容至刻度，配制成浓度为5μg/mL、10 μg/mL 20 μg/mL50 μg/mL、100μg/mL、200μg/mL的系列混合标准工作溶液，现用现配.
5.5材料
微孔滤膜：0.22gm水系.
6仪器和设备
6.1高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器.6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g.6.3分析研磨机.6.4涡旋振荡器.6.5离心机：离心力不小于3120g，带有15ml转子.6.6超声波清洗器：功率大于或等于900W.
7试样制备与保存
取10g新鲜桂花或干桂花样品，液氮冷冻，用研磨机粉碎30s至颗粒均匀，过100目筛，放人分装容器中，立即检测或用封口膜密封处理，放于一18℃冻存备用，有效期2个月.
8测定步骤
8.1提取
称取0.1g试样（精确到0.0001g）于15mL离心管中，加人10mL80%乙醇水溶液（5.2.3），涡靛振荡10s，室温下超声提取30min，3120g离心力或以上离心10min，取上清液；往残渣中再次加人10mL80%乙醇水溶液（5.2.3），涡旋振荡10s，按上述条件离心，合并两次提取液于25mL容量瓶中，用水定容至刻度，混匀，取适量清液经0.22pm微孔滤膜（5.5）过滤后待检测.
8.2测定
8.2.1色谱参考条件
液相色谱参考条件：
b）检测波长：285nm； a）色谱柱：Cs（4.6mm×250mm，5gm）反向色谱柱或性能相当者；（d）进样量：10gL;e）流速：1.0mL/min;f）流动相；A为0.1%乙酸水溶液（5.2.1).B为乙晴（5.1.4）.流动相梯度条件见表1.
