NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T1859.6-2014
农药抗性风险评估 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估
Guidelines on the risk assessment for pesticide resistance
Part 6:The risk assessmentforBotrytis spp.resistance tofungicides
中华人民共和国农业部发布
前言
NY/T1859《农药抗性风险评估》为系列标准：
本部分是NY/T1859的第6部分.
第1部分：总则：第2部分：卵菌对杀菌剂抗药性风险评估；一第3部分：虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性风险评估； 第4部分：乙酰乳酸合成酶抑制剂类除草剂抗性风险评估；第5部分：十字花科蔬菜小菜蛾抗药性风险评估；第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估；一第7部分：抑制乙酰辅酶A羧化酶除草剂抗性风险评估；
本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草，本部分由农业部种植业管理司提出并归口.本部分起草单位：农业部农药检定所、中国农业大学农学与生物技术学院. 本部分主要起草人：朱春雨、刘西莉、杨峻、张楠、张佳、陈立萍、刘鹅飞.
农药抗性风险评估 第6部分：灰霉病菌抗药性风险评估
1范围
本部分规定了灰霉病菌对登记用杀菌剂抗药性风险评估的基本要求和方法.
本部分适用于可引起灰霉病的葡萄孢属病原真菌对具有直接作用方式的杀菌剂抗药性风险评估.该葡萄孢属病原真菌包括灰葡萄孢菌（Botrytis cinereaPers.）、葱鳞葡萄孢菌（Botrytis squamosaWallker）、葱腐葡萄孢菌（BotrytisalliiMunn）等多种.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修订单）适用于本文件，
NY/T1156.1~1156.2-2006农药室内生物测定试验准则NY/T1859.1-2010农药抗性风险评估第1部分：总则 NY/T1667.1~1667.8农药登记管理术语
3术语和定义
NY/T1667.1~1667.8界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
3.1 药荆珊化fungicide adaption
用杀菌药剂连续对病原菌处理使其对处理药剂忍受能力增加的过程，
3.2紫外诱变UV-mutagenesis用紫外线照射病原菌的菌丝或孢子，诱发病原菌发生与抗药性相关的突变.
3.3抗药性突变频率fungicideresistance mutationfrequency
3.4最小抑制浓度minimum inhibitory concentration（MIC） 可完全抑制病原菌孢子萌发或菌丝生长的最低药剂浓度.
抗药性菌株对该药剂的敏感性（以EC或MIC表示）与其亲本菌株敏感性或与敏感基线的平均EC或MIC的比值，
3.6
病原菌在存活、生长、致病、繁殖等方面的能力.
NY/T 1859.6-2014
3.7
交互抗药性cross-resistance
病原菌对某一杀菌剂产生抗药性时，也对其他未接触过的杀菌剂表现抗药性的现象，也称正交互抗药性.
负交互抗药性negative cross-resistance
病原菌对一种杀菌剂产生抗药性时，则对其他未接触过的杀菌剂表现为更加敏惑的现象.
4抗药性风险评估
4.1抗药性风险的影响因子
4.1.1药剂
多作用位点、非选择性杀菌剂如百菌清、克菌丹等在理论上属于低抗性风险的药剂：单作用位点、选择性强的杀菌剂如多菌灵等苯并咪唑类的杀菌剂、噻菌酯等甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂理论上属于高抗性风险药剂.用于灰霉病害防治的其他杀菌剂，如乙霉威等N-苯基氨基甲酸酯类杀菌剂、腐霉利等二甲酰亚胺类杀菌剂、嘧霉胺等苯胺嘧啶类杀菌剂、苯醚甲环唑、戊唑醇和味鲜胺等唑类杀菌剂、略菌睛等 吡略类杀菌剂、环酰菌胺等经基苯胺类杀菌剂、啶酰菌胺等琥珀酸脱氢酶抑制剂理论上属于中等抗性风险药剂.
4.1.2靶标生物
葡萄泡属真菌无性阶段属真菌界，半知菌门（Deuteromycota）（或无性型真菌类，Anomorphicfunris)：有性阶段属子囊菌门（Asycota）、盘菌纲（Disycetes）、柔膜菌目（Helotiales）、核盘菌科 gi）、丝孢纲（Hyphomycetes）、丝孢目（Hyphomycetales）、淡色孢科（Moniliacene）、葡萄孢属（Borry（Sclerotiniacese）、葡萄孢盘菌属（Botryorinia）.葡萄孢属真菌有20多个种，多数能够引起植物的灰霉病，其中以灰葡萄孢（BotryriscinereaPers.）分布最为广泛，在田间主要以气流传播，病菌繁殖周期短、FRAC（FungicideResistance ActionCommittee）将该菌归为高抗药性风险的病原菌. 再侵染频繁、寄主范围广，并且存在异核现象和非整倍体分裂现象可引起后代中出现较大的遗传变异，
4.1.3农事操作风险
大面积种植单一品种作物、单作或连作的农事操作抗性风险高.增加药剂选择压力和加重病害发生的施药技术和耕作栽培措施均会增加抗药性风险.
4.2抗性风险评估内容
4.2.1敏感基线的建立
在未使用过待评估药剂及与其具有相同作用机理药剂的多个代表性地区采集供试菌株（60株～100株）.按照NY/T1156.1~1156.2-2006中的方法测定其对该药剂的敏感性（EC值或MIC值）.如果菌株的敏惑性分布频率呈单峰分布，则这些菌株可视为野生敏感菌株，其对药剂的敏感性（EC值或MIC值）的平均值可作为靶标菌对该药剂敏感基线的EC或MIC值.
4.2.2药剂特性及交互抗性
明确待评估药剂所属类型、作用方式、作用机制及其活性和持效期；调查该药剂（或同类药剂）在当地使用的历史、使用频率；同类药剂是否有抗药性的现象；当地是否采取了抗药性治理措施.参考以上调查结果，并依据对敏感菌株和抗药性菌株毒力测定结果，分析该药剂是否与生产上常用药剂之间具有交互抗药性或负交互抗药性.
4.2.3靶标病原菌产生抗药性的潜能
采用紫外诱变或药剂化的方法在室内进行抗药性菌株的诱导，紫外诱变时以紫外光照射后菌丝或孢子致死率为90%~95%的照射剂量处理，以杀菌剂MIC进行抗药性突变体筛选；药剂驯化时须将
靶标菌接种于带药浓度接近MIC浓度的培养基平板上，培养数天后挑取孢子能够萌发并正常扩展的菌落或出现角突变的菌落边缘菌丝.在含药浓度逐步提高的含药平板上连续培养多代之后，将在含MIC药剂浓度之上还能生长的菌落，确定为疑似突变体，在无药培养基平板上转接继代培养3代后测定其对杀菌剂的敏感性，获得抗药性状能够稳定遗传的菌株.靶标病原菌产生抗药性的潜能以抗药性突变频率表示.
抗药性突变频率X按式（1）计算.
x= N ×100
式中：
X一一抗药性突变频率，单位为百分率（%）；N一筛选获得的抗药性菌体数量，单位为个：N-用于抗药性筛选的供试靶标病原菌群体数量总和（孢子数或菌饼数），单位为个. 抗性指数RF按式（2）计算.
式中：
RF--抗性指数；E--抗药性菌株对该药剂的敏感性（EC）.单位为微克每毫升（pg/mlL)；E-亲本菌株对该药剂的敏感性（EC），单位为微克每毫升（pg/mL).计算结果保留整数.
4.2.4抗药性菌株的适合度
测定靶标病原菌的菌丝生长速率、温度敏感性、分生孢子产生能力、孢子萌发能力、致病力、竞争力等适合度相关的生物学性状指标，比较抗药性菌株和敏感菌株（包括亲本菌株）有无差异，具体方法参见附录A.如果抗性群体的适合度明显低于敏感群体（包括亲本菌株），则待评估药剂田间使用后靶标菌 对其产生抗药性的风险较低.如果抗性群体的适合度接近或高于敏感群体（包括亲本菌株），则待评估药剂具有一定的抗性风险.如果抗性群体的适合度明显高于敏感群体（包括亲本菌株），待评估药剂产生抗性风险较高.
4.2.5抗性风险级别分析
依据抗药性菌株的突变频率、抗性指数和适合度测定结果，并结合交互抗药性、抗性遗传、药剂的活性及其作用机制和病害特征等研究结果，综合分析药剂在田间推广使用后产生抗药性的风险.
4.2.5.1高抗性风险
如果药剂持效期长、作用位点单一、田间有同类药剂使用的历史、靶标病原菌易于产生抗药性突变、抗性指数很高，抗药性菌株适合度接近或高于敏感群体（包括亲本菌株），则该药剂的田间使用风险级别 为高风险.
4.2.5.2中等抗性风险
如果药剂作用位点单一、田间有同类药剂使用的历史、靶标病原菌易于产生抗药性突变、抗性指数低到中等、抗药性菌株适合度低于敏感群体（包括亲本菌株），则该药剂的田间使用风险级别为中等风险.
4.2.5.3低抗性风险
如果药剂为多作用位点，田间没有同类药剂使用的历史、抗药性菌株突变频率较低、抗性指数低等、抗药性菌株的适合度显著低于敏感群体亲本菌株，则该药剂的田间使用风险级别为低等风险.
5抗性风险管理
5.1一般原则
