NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 2822-2015
蜂产品中砷和汞的形态分析 原子荧光法
Speciation determination of arsenic and mercury in bee products-Atomicfluorescencespectrometry
中华人民共和国农业部发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由农业部畜牧业司提出. 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会（SAC/TC274）归口.本标准起草单位：农业部农产品及转基因产品质量安全监督检验测试中心（杭州）.本标准主要起草人：张水志、王钢军、叶雪珠、王强、徐丽红、王.
蜂产品中砷和汞的形态分析原子荧光法
1范围
本标准规定了采用原子荧光法测定蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆及其冻于粉中砷和汞形态的分析方法.
本标准适用于蜂蜜、蜂花粉、蜂王浆及其冻干粉中无机砷（亚砷酸根与砷酸根的总和）、一甲基肿酸（MMA）、二甲基肿酸（DMA）、无机汞、甲基汞和乙基汞的测定.
本标准的方法检出限：无机汞、甲基汞和乙基汞分别为2.0pg/kg、0.80μg/kg和0.10μg/kg，无机砷、一甲基肿酸、二甲基肿酸各为10pg/kg.
砷、一甲基肿酸、二甲基肿酸各为30μg/kg. 本标准的方法定量限：无机汞、甲基汞和乙基汞分别为6.0μg/kg、2.40μg/kg和0.30pg/kg，无机
2规范性引用文件
件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
原子荧光光谱仪检测；不同形态的乘与氧化剂混合经紫外灯照射在线消解后，形成离子态的汞，再与还 样品中不同形态的砷或汞经过提取、净化，用液相色谱柱分离后，不同形态的砷经过氢化物反应用原剂作用生成原子态汞，用原子荧光光谱仪检测.通过保留时间和峰面积与标准溶液进行比较，外标法定量.
4试剂与材料
除非另有规定，仅使用分析纯试剂.
4.1水.GB/T6682，一级，4.2氨水.4.3乙睛：色谱纯.4.510%甲酸溶液；吸取10mL甲酸于装有约70mL水的100mL容量瓶中，加水至100mL，摇匀.4.67%盐酸溶液：吸取70ml.盐酸于装有约700mL水的1000mL容量瓶中，加水至1000mL.摇匀.4.710%盐酸溶液：吸取10mL盐酸于装有约70mL水的100ml.容量瓶中.加水至100mL，摇匀.4.8盐酸一硫脉一氯化钾溶液：称取1.0g硫脲、0.15g氯化钾于烧杯中，用10%盐酸溶液（4.7）溶解后，转人100mL容量瓶中并定容、摇匀.4.91%硝酸溶液：吸取1mL硝酸（优级纯）于装有约70mL水的烧杯中，转人100mL容量瓶中并定4.100.1%二乙氨基二硫代甲酸钠溶液；称取0.1g二乙氨基二硫代甲酸钠（分析纯）于100mL烧杯 容、摇匀.中，用少量水溶解后，转人100mL容量瓶中并定容、摇匀.4.1110%乙請溶液：吸取10mL乙脑（色谱纯）于装有少量水的烧杯中.转入100mL.容量瓶中并定
4.4甲醇：色谱纯.
容、摇匀.
4.1210%甲醇溶液：吸取10mL甲醇（色谱纯）于装有少量水的烧杯中，转入100mL容量瓶中并定容、摇匀.4.130.5%氢氧化钾溶液：称取5.0g氢氧化钾于烧杯中.加人少量水溶解后，转人1000ml.容量瓶中 并定容、摇匀.4.14还原剂：称取1.5g硼氢化钾溶于100ml.0.5%氢氧化钾溶液（4.13）中，混匀，现用现配.4.15氧化剂：称取1.0g过硫酸钾溶于100mL0.5%氢氧化钾溶液（4.13）中，混匀.4.16无机汞（Hg²-）标准储备液（100mg/L）：吸取5mL.浓度为1000mg/L的有证标准溶液于50mL4.17甲基汞、乙基汞的混合标准储备液（100mg/L）：分别准确称取125.2mg和132.6mg的氯化甲 容量瓶中，加人0.5ml.盐酸后，定容、摇匀.基汞和氯化乙基汞标准品于烧杯中，用少量水转人1000mL容量瓶中，定容摇匀后，4C以下冷藏避光保存.4.183种形态汞混合标准中间液（1.0mg/L）：准确吸取甲基汞、乙基汞的混合标准储备液（4.17）1.0mL.无机汞（Hg²）标准储备液（4.16）1.0mL.定容至100mL，现配现用.混合标准中间液（4.18），分别置于100mL容量瓶中.并定容摇匀，得到3种形态汞的质量浓度分别为：0、10. 0 ng/mL、20. 0 ng/mL 30. 0 ng/mL、40.0 ng/mL、50. 0 ng/mL，过0. 45 μm 滤膜，备用.4.204种形态砷混合标准工作液：根据亚砷酸根（三价砷）、砷酸根（五价砷）、一甲基肿酸、二甲基肿酸有证标准物质的标示浓度值，分别用1%的硝酸溶液（4.9）配制成浓度约为0、10.0ng/mL、20.0ng/4.21乙睛-乙酸铵-（L-半胱氨酸）溶液：称取2.5g乙酸铵（色谱纯）和0.5gL-半胱氨酸（含量 mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL的混合标准工作溶液，备用.>98.5%）于100mL烧杯中.用少量水溶解后转人500mL容量瓶中，加人25mL乙睛（色谱纯），加水至500mL.过0.45gm滤膜，再超声30min，去除气泡，备用.4.2225mmol/L磷酸氢二铵溶液：称取1.65g确酸氢二铵溶于500mL水中.用10%甲酸（4.5）调节4.23滤膜：水相.0.45μm（*50mm、413mm）. pH为5.8，过0.45μm滤膜，再超声30min，去除气泡，备用.4.24注射针筒：10mL.4.25微量注射器：250gzl.4.26氩气：纯度不低于99.99%.
5仪器
5.1原子荧光形态分析仪（配备液相分离系统：高效液相色谱泵、进样装置以及紫外灯消解装置）.5.2高速振荡混合器：转数不低于1000r/min.5.3高速离心机：转数不低于8000r/min.5.4涡旋混合仪.5.5分析天平：感量0.0001g，0.001g 5.6pH计：精度为0.01.5.7超声波清洗器.5.8烘箱.
6试样制备
6.1蜂蜜 2
取适量无结晶的样品，搅拌均匀，对于结品的样品，在密闭的情况下，放置于不超过60℃的水浴中溶解称样前冷却至室温，搅拌均匀.室温保存.
6.2蜂王浆及冻干粉
将液体、浆状、粉状的样品充分混合均匀；将低温保存的固体样品进行粉碎磨细，试样于一20℃C冰箱中保存备用.
6.3蜂花粉
进行粉碎磨细，室温保存.
7分析步骤
7.1汞形态提取
7.1.1提取
蜂花粉和蜂王浆冻干粉称取0.2g~1.0g（精确到0.1mg）.蜂王浆和蜂蜜称取1.0g~2.0g（精确到0.1mg）.样品于10mL离心管中.加人2mL盐酸一硫一氧化钾溶液（4.8）.在高速振荡混合器上 混旋提取15min，离心10min，上清液倒入10mL离心管中，剩余的残渣再用2mL10%盐酸1%硫默0.15%氯化钾溶液（4.8）提取1次，合并2次上清液，加人0.5mL氨水中和.定容到10mL，取适量定容后的溶液离心10min，过0.45pm孔径滤膜，得到提取液.待测，
7.1.2净化
SPE小柱（填料为100mg）活化，然后用4mL0.1%二乙氨基二硫代甲酸钠溶液（4.10）改性，再用4ml 颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行测定，首先分别用4mL.纯乙請和4mL水将C的水冲洗，将3mL样品提取液通过Cu的SPE小柱，然后用4ml水冲洗小柱，再用5mL10%乙請溶液（4.11）清洗，最后用3mL乙晴一乙酸铵一（L-半胱氨酸）溶液（4.21）分3次洗脱，合并收集洗脱液用于测定.
7.2砷形态提取
7.2.1提取
蜂花粉和蜂王浆冻干粉称取0.2g~1.0g（精确到0.1mg），蜂王浆和蜂蜜称取2.0g~5.0g（精确到0.1mg）.置于10mL具塞玻璃比色管中，加入10mL1%硝酸溶液（4.9），于90℃烘箱中热浸提2h，每0.5h振摇1min，浸提完毕，取出冷却至室温，补加硝酸溶液（4.9）转入塑料离心管中，离心15min，取上层清液，经0.45pm滤膜过滤，得到提取液，待测，颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行 测定.
7.2.2净化
先将C小柱（规格1.0mL）进行活化：用注射针筒抽取10mL的甲醇（4.4）通过滤膜和小柱，通过的时候保持其流速（每秒2滴），再用10mL的水通过滤膜和小柱，通过的时候保持其流速（每秒2滴），
颜色较深的提取液应经过净化处理后再进行测定，吸取5mL提取液通过滤膜和C小柱（规格1.0mL），弃去前3mL，收集流出液，用于测定.每净化完一个样品后依次以10mL甲醇（4.4）、15mL水冲洗，可用于对下一个样品提取液的净化.
7.3液相色谱参考条件
7.3.1.1色谱柱参数：C色谱柱，150mm×4.6mm，5μm粒径或相当者.7.3.1.2流动相：乙-乙酸铵-（L-半胱氨酸）溶液（4.21）.7.3.1.3流速：1.0mL/min.7.3.1.4进样量：100l
