中华人民共和国农业行业标准
NY/T3867-2021
粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹 阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素的快速 检测胶体金法
Rapid detection of aflatoxin B cyclopiazonic acid and sterigmatocystin inproducts of cereals and oil crops by colloid gold method
中华人民共和国农业农村部发布
食典通十部分：标准化文作 的规定起草.
本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本文件起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业农村部生物毒素检测重点实验室、农业农村部油料产品质量安全风险评估实验室（武汉）国家农业检测基准实验室（生物毒素）.
本文件主要起草人：张奇、唐晓借、李慧、王督、 李培武
粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、 杂色曲霉毒素的快速检测胶体金法
1范围
本文件规定了粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素和杂色曲霉毒素快速检测的胶体金法.
本文件适用于花生、大米、玉米、小麦、大豆五种粮油作物产品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素的快速筛查.其他粮油作物产品可参考.
本方法检出限：黄曲霉毒素B1.0pg/kg，环匹阿尼酸毒素50.0pg/kg，杂色曲霉毒素200.0pg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
试样中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素与胶体金标记的特异性单克隆抗体发生结合后，抑制了流动过程中抗体与硝酸纤维素膜检测线上黄曲霉毒素B-BSA偶联物、环匹阿尼酸毒素-BSA偶联物、杂色曲霉毒素-BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色变浅，通过检测颜色变化进行测定试样中毒 素的含量水平.
5试剂
除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂.
5.2乙晴（CHCN）. 5.1水，符合GB/T6682中规定的二级用水.5.3蔗糖（CHO）.5.4牛血清白蛋白（BSA），纯度大于98%.5.6氯化钠（NaCI）.5.7黄曲霉毒素B（CAS号：1162-65-8)，纯度大于98%. 5.8环匹阿尼酸毒素（CAS号：18172-33-3），纯度大于98%.5.9杂色曲霉毒素（CAS号：163391-76-2），纯度大于98%.5.11试样稀释液：称取1.0g蔗糖（5.3）、0.5g牛血清白蛋白（5.4）和2.5g吐温-20（5.5），用水（5.1）溶解定容至100.0ml现用现配.5.12黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素标准样品储备溶液：分别称取标准品黄曲霉毒素B（5.7）、环匹阿尼酸毒素（5.8）、杂色曲霉毒素（5.9）各1.0mg（精确至0.01mg），用乙晴（5.2）溶解定容至
5.5吐温-20（CHO）.
5.1070%乙晴溶液：取70ml.乙腊（5.2）和30ml水（5.1)，混匀.
10.0ml..此标准溶液浓度为0.10mg/ml.-20C保存，备用.
5.13胶体金标记抗体复合物：黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素单克隆抗体的纯度不低于80%，亲和力常数不低于1.00×101/mol、与其他毒素交叉反应率小于10%.
6仪器设备
6.1胶体金多通道检测仪.信号值变异系数CV≤3.0%.
6.2免疫层析检测试纸条：固定有黄曲霉毒素B-BSA偶联物、环匹阿尼酸毒素-BSA偶联物、杂色曲霉毒素-BSA偶联物，用于样品中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素与胶体金标记抗体预反应 后再与偶联物反应的载体.
6.3均质机.
7分析步骤
7.1样品提取、 纯化与 白基质器液
准确称取 氯化钠及加入100ml乙脂 滤液，加人3 . 8）过 ）过滤.取1.0ml 备用.
7.1.2空白基质
取空白样品7.2取50L 杂色曲霉毒素混合溶液于1.5ml样 7.3取7.1.1制（6.5）中反应3min. 最出 插人到加样后的样品瓶 样品瓶置于恒温装置中，于恒温装置（6.5）中 6m1 试纸 上机（ 测.
7.4标准曲线
将黄曲霉毒素B、环匹阿尼 素、杂色画霉毒素标准溶液（ 用空白基质溶液（7.1.2）配制为系列梯度标准工作液，按由低到高的浓 信号值与质控线C信号值的比值（T/C）和标准济 液浓度的自然对数值（lnc）建立标准曲线（r≥0.95）. 测（每个样品重复3次），根据检测线T
8结果计算
8.1结果测定
（pg/kg）表示，按公式（1）计算. 试样中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素含量以质量分数X计，数值以微克每千克
X=exVxnm
式中：
X一试样中黄曲霉毒素B、环匹阿尼酸毒素、杂色曲霉毒素含量的数值，单位为微克每千克（pg/kg）；
从标准曲线上查得的测定液中毒素含量的数值，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V 样品测定液体积的数值，单位为毫升（ml.）：N 试样稀释倍数； 试样质量的数值，单位为克（g）.计算结果保留至小数点后一位.
9精密度
9.1重复性
在重复性条件下，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%.
在再现性条件下，2次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的25%.
