中华人民共和国农业行业标准
食用菌中L-麦角硫因的测定 超高效液相色谱法
Determination of L-ergothioneine in edible fungi-Ultra highperformance liquid chromatography
中华人民共和国农业农村部发布
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本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口.
本文件起草单位：上海市农业科学院、农业农村部食用菌产品质量监督检验测试中心（上海）.
白冰、董慧、范婷婷、何香伟、李健英. 本文件主要起草人：张艳梅、鄂恒超、赵晓燕、周昌艳、陈磊、赵志明、李晓贝、刘海燕、任佳丽、冯路路、
食用菌中L-麦角硫因的测定超高效液相色谱法
1范围
本文件适用于食用菌中1-麦角硫因含量的测定.本文件方法的定量限：鲜样为2.0mg/100g，干样为4.0mg/100g.
本文件规定了食用菌中1-麦角硫因含量的超高效液相色谱测定方法.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性开用面构成本 少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用 本文 的修改单）适用于本文件.
3术语和定义
本语3.1
学名2-硫基组安1 甲基内站 下敏感，是一种具有重要生理活生的稀在天然于性额
4原理
食用菌样品中 . 外检测器或二极管阵列检测器的超高
5试剂与材料
5.40.1%甲酸甲醇溶液：准确吸 甲酸（5.3）加甲醇（5.2）定容至 至1000ml混匀
5.570%甲醇水溶液：量取700ml甲醇 混匀.
5.60.1%甲酸乙睛溶液：准确吸取1ml.甲酸（5.3）加乙脂（5.1）定容至1000ml.混匀并脱气.
5.70.1%甲酸水溶液：准确吸取1ml.甲酸（5.3）加水定容至1000ml.混匀并脱气.
5.81-麦角硫因（CHNOS.CAS号：497-30-3）标准品：纯度≥98%.
5.91-麦角硫因标准储备溶液配制：称取L-麦角硫因标准品10mg（精确至0.0001g），用水溶解并定容至10ml.L-麦角硫因标准储备溶液（100mg/1.)，-18C保存，有效期2个月.
5.10L-麦角硫因标准工作溶液配制：准确移取一定量的L-麦角硫因标准储备溶液（5.9）.用0.1%甲酸甲醇溶液（5.4）逐级稀释得到一系列的标准工作溶液（质量浓度分别为1.0mg/L、2.0mg/L、5.0mg/L、10 0 mg/1.、20 0 mg/L、50. 0 mg/L).临用现配.
5.11有机系微孔滤膜；0.22gm.
NY/T3872-2021
6仪器和设备
6.1超高效液相色谱仪：配置有紫外检测器或二极管阵列检测器.6.2天平：感量0.01g和0.0001g.6.3超声波清洗器.6.5氮气吹干仪.6.6涡旋混合器. 6.7均质机.6.8样品粉碎机.6.9标准筛：0.425mm
6.4离心机：不低于4000r/min.
7分析步骤
7.1试样制备
7.1.1鲜样
取不少于1000g食用菌鲜样，用干净纱布轻轻擦去表面附着物，切碎后，放置于均质机（6.7）中粉碎成匀浆状，于密封容器中一18C保存备用.称取试样时，冷冻试样应先解冻再混匀.
7.1.2干样
取不少于200g食用菌干样，放置于样品粉碎机（6.8）中粉碎，过0.425mm标准网筛，制成待测样，于密封容器中常温保存备用，称取试样时，常温试样应搅拌均匀.
7.2提取
7.2.1鲜样
称取2g试样（精确至0.01g），置于50ml.离心管中.准确加人40.00ml.0.1%甲酸甲醇溶液（5.4），在超声波清洗器中超声提取10min后，于4000r/min离心5min，取2ml.提取液，过0.22μm滤膜后，取1mL.滤液供超高效液相色谱仪测定.
7.2.2干样
称取1g试样（精确至0.01g），置于50ml.离心管中，准确加40.00ml.70%甲醇水溶液（5.5），超声波清洗器超声提取30min后，4000r/min离心5min，取2mL提取液吹至近干.用2mL0.1%甲酸甲醇溶液（5.4）复溶过0.22um滤膜后，取1ml.滤液供超高效液相色谱仅测定.
7.3测定
7.3.1色谱参考条件
色谱柱：HIL.IC色谱柱（2.1mm×100mm.1.7m），或相当规格色谱柱；流动相：0.1%甲酸乙晴溶液（5.6)-0.1%甲酸水溶液（5.7）（8812.V/V）；流速;0. 4 ml/min;柱温：40C：波长：262nm; 进样量：3pl.
7.3.2标准曲线的绘制
用L-麦角硫因系列标准工作溶液（5.10），参考上述色谱条件（7.3.1）进行测定，以标准工作溶液的质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制L麦角硫因的标准曲线.1麦角硫因标准工作溶液的色谱图参见附录A.
7.3.3定量测定
按照保留时间进行定性，样品与相似浓度下标准品保留时间的相对偏差不大于2%，外标法定量.待
