QB
中华人民共和国轻工行业标准
QB/T5299-2018
葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（c/c） 测定方法液相色谱联用稳定同位素比值 质谱法
Determination of the3c/²Cisotoperatio ofglycerol inwines-Method using
中华人民共和国工业和信息化部发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由中国轻工业联合会提出.本标准起草单位：中国食品发酵工业研究院有限公司、北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心、 本标准由全国食品发酵标准化中心归口.新疆中信国安葡萄酒业有限公司、江南大学.本标准主要起草人：钟其顶、王道兵、韩深、毛健、赵玉玲、岳红卫.
本标准为首次发布.
葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（c/c）测定方法
液相色谱联用稳定同位素比值质谱法
1范围
本标准规定了应用液相色谱-稳定同位素比值质谱法测定甘油稳定碳同位素比值（"c/"c）的方法.本标准适用于葡萄酒中甘油稳定碳同位素比值（"cC）的测定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法
GB/T6682-2008分析实验室用水规格和试验方法
3符号和缩略语
下列符号和缩略语适用于本文件.c/"c：稳定碳同位素比值，即稳定碳同位素c与²c的原子丰度之比 8C：样品的稳定碳同位素比值相对于参考物质的稳定碳同位素比值的千分差VPDB：美国南卡罗来纳州白垩纪皮狄组层位中的拟箭石化石，是稳定碳同位素比值的国际基准物质（Vienna Pee-Dee Belemnite）LC-IRMS：液相色谱联用稳定同位素比值质谱仪（LiquidChromatography coupled toIsotopeRatioMass Spectrometry)
4原理
用LC-IRMS测定样品中甘油经分离纯化后转化成的二氧化碳中的稳定碳同位素比值，并通过公式计算得出甘油的稳定碳同位素比值，记作6"CvPDB
5试剂和材料
除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682一2008规定的一级水.
5.1参考物质
可选择国际原子能机构或全国标准物质管理委员会认定认可，或选择同类获得国际/国家认可的参考物质，根据实际工作需要选择其中一种或几种，参见附录A.
5.2氮气：纯度不应小于99.999%.
5.3二氧化碳工作标准气：纯度不应小于99.99%.
5.4浓硫酸.
5.5硫代硫酸钠：纯度不应小于99%.
5.6磷酸：纯度不应小于99%.
5.7甘油：纯度不应小于99%
QB/T5299-2018
6仪器和设备
6.1液相色谱-稳定同位素比值质谱仪.6.5移液枪：100L.
6.2溶剂过滤器.
6.3分析天平.
6.4水系滤膜：0.22μm.
7分析步骤
7.1样品处理
用水将葡萄酒样品稀释至甘油含量0.3g/L~0.4g/L，样品溶液用水系滤膜过滤（6.4）后保存待用.
7.2工作标准溶液配制
选择8CvpDB值分布范围为-35%~-5%（定值方法参见附录B）的甘油（5.7）作为工作标准物质，称取0.02g甘油并用水稀释至甘油含量0.3g/L~0.4g/L，用水系滤膜过滤后保存待用.
7.3试剂配制
7.3.10.0005mol/L硫酸溶液：移取27uL浓硫酸（5.4），用水定容至1000mL，混匀后用溶剂过滤器（6.2）过滤.7.3.20.25mol/L硫代硫酸钠溶液：称取39.5g硫代硫酸钠（5.5），用水溶解并定容至500mL，混匀后用溶剂过滤器过滤.7.3.30.5mol/L磷酸溶液：称取49.0g磷酸（5.6），用水溶解并定容至500mL，混匀后用溶剂过滤
器过滤.
7.4参考色谱条件
7.4.1色谱柱：H弱阳离子交换色谱柱（300mmX7.7mm×8um）或性能相当者.7.4.2流动相：0.0005mol/L硫酸溶液（7.3.1）.7.4.4色谱柱温度：60℃. 7.4.3流量：300μL/min.
7.5反应炉条件
7.5.1氧化剂：0.25mol/L硫代硫酸钠溶液（7.3.2），流速50gL/min.7.5.2酸剂：0.5mol/L磷酸溶液（7.3.3），流速50gL/min. 7.5.3反应炉温度：99.7℃.
7.6测定
7.6.1仪器准备
7.6.1.1LC-IRMS稳定性检查：连续测定同一个工作标准溶液，三次测量结果6C的标准偏差≤0.2%为合格.
7.6.1.2LC-IRMS线性检查：取o"Cvroe值已知但不同的甘油工作标准溶液，分别测定后对比测定值c和给定值8CvrDB，测定值与给定值的线性相关系数R²≥0.99为合格.
7.6.2样品分析
样品置于LC-IRMS的进样盘中，取10gL样品按照7.4和7.5中的条件进行样品分析.
7.6.3分析序列
采用两点标准漂移校正模式安排分析序列，测试序列的开始和结束各测定3次参考物质或甘油工作标准物质，序列中每隔6次～10次测试后应再次测定参考物质或甘油工作标准物质.
8计算
8.1分析结果的表述
样品中甘油的碳同位素组成以其对标准物质中相应同位素比值的千分差表述，按公式（1）计算：
式中：
C样品中甘油转化的CO气体c/²c测定结果相对于二氧化碳工作标准气c/²c测(c/²C)sA-样品中甘油转化的CO的c/²c测定结果； 定结果的千分差：(c"C)s二氧化碳工作标准气的c/c测定结果.
8.2结果计算
所测的碳同位素组成结果应校准到国际标准VPDB值.可根据7.6.3中甘油工作标准物质的测定值和给定值建立回归方程，通过回归方程计算中得出葡萄酒甘油oCvDB值，或按公式（2）计算：
C(%）=ARCR10xCAMCM-（2)
式中：
CsA-RM（%）--样品相对工作标准溶液的C（%）同位素值； CvPDB（%）--样品相对VPDB的8C（%）同位素值；CRMVPDB（%）工作标准溶液相对VPDB的C（%）同位素值.
结果保留至小数点后两位.
9精密度
本标准的精密度数据按照GB/T6379.2的规定确定，重复性和再现性的值以95%的可信度计算.
9.1重复性限
在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限（r）：r=0.40%.如果差值超过重复性限（r），应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定.
9.2再现性限
在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限（R）：R-0.60%.
