中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 4811-2017
Determination ofemamectin benzoate residues in live animal forimportandexport-LC-MS/MSmethod
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.
本标准起草单位：中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院.
本标准主要起草人：陈兵、肖陈贵、林彦星、胡运发、沈金灿、刘建利、陈沛金、孙洁、杨俊兴、秦智锋、花群义、卢体康.
进出口食用动物艾玛菌素残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法
1范围
本标准规定了猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅等进出口食用动物中艾玛菌素药物残留量的液相色谱-质谱/质谱检测和确证方法.
本标准适用于猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅的血液以及猪、牛、羊尿液中艾玛菌素药物残留量的测定.
本标准适用于出入境检验检疫工作.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修政单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3方法提要
试样中艾玛菌素药物残留用乙晴提取，经无水硫酸镁及C萃取净化，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量.
4试剂材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.3净化填料：500mg硫酸镁与100mgC粉末的混合物.
4.40.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸（4.2）用去离子水定容到1000mL，摇匀.
4.50.1%甲酸乙晴溶液：取1mL甲酸（4.2）用乙睛（4.1）定容到1000mL 摇匀.
4.6标准曲线定溶液：取50mL0.1%甲酸水溶液（4.4）和50mL0.1%甲酸乙晴溶液（4.5）混合，摇匀.
4.7标准物质：艾玛菌素（EmamectinBenzoate），纯度≥99.4%（艾玛菌素的基本信息见附录A）.
4.8标准储备溶液：100mg/L.准确称取适量的艾玛菌素（4.7），用乙晴配制成浓度为100mg/L的艾玛菌素标准储备溶液.
4.9标准工作溶液：吸取适量的标准储备溶液（4.8），用标准曲线定溶液（4.6）配制成不同浓度系列的标准工作溶液（现用现配）.
4.10微孔滤膜：0.22μm有机膜.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仅：配有电喷雾离子源（ESI）.
SN/T 4811-2017
5.4分析天平：感量0.0001g、0.001g和0.1g.5.5移液器：量程10pL~100pL、100μL~1000μL和1000pL~5000pl 5.6聚丙烯离心管：50ml.和15ml.具塞.5.7离心机：转速不低于5000r/min.
5.2高速组织匀浆机.
5.3旋涡混匀器.
6试样制备与保存
血浆：将新鲜血液采集后加入含抗凝剂的试管中，混匀，5000r/min离心10min（温度低于10℃），取上层血浆；尿液：5000r/min离心去除沉淀物，取上清液备用.
血浆、尿液试样均分为2份，装人洁净容器，密封，并标明标记，于-18℃以下冷冻存放.
在制样操作过程中，应防止样品被污染或残留物含量发生变化.
7测定步骤
7.1提取
吸取5mL试样于50mL聚丙烯离心管中，加人20mL乙腊（4.1），涡混匀1min，超声提取20min，5000r/min离心5min，将提取液转移至另一离心管中，待净化.
7.2净化
吸取5mL提取液至装有净化填料（4.3）的15mL离心管中，涡混匀1min，5000r/min离心5min，取上层溶液过0.22pm有机滤膜，液相色谱-质谱/质谱仪测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
液相色谱条件如下：
a）色谱柱：C柱，2.1×100mm，2.7μm，或相当者；b）流动相及梯度洗脱条件见表1.c）柱温：40C；d）进样量：10pL;e）流速：0.3mL/min.
表1流动相及梯度洗脱条件
时间 0.1%甲酸水溶液 0.1%甲酸乙晴溶液min % %0 50 505.0 5 956 0 5 9510 0 6.1 50 50 50 50
7.3.2质谱条件
参见附录B.
7.3.3液相色谱-质谱/质谱测定
7.3.3.1定性测定
在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内：化合物的质谱定性离子至少应包括一个母离子和两个子离子，且定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比，其允许偏差不超过表2规定的范围.
表2定性时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% ≤10%允许的相对偏差 %02干 ±25% ±30% ±50%
7.3.3.2定量测定
应值均应在仪器检测的线性范围内，以外标法定量.标准工作溶液和样液应等体积参插进样测定.标 根据样液中化合物含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中化合物的响准溶液的选择反应监测色谱图参见附录C中图C.1.
7.4空白实验
除不加试样外，按上述测定步骤进行.
7.5结果计算和表述
试样中艾玛菌素残留量可用数据处理系统按外标法自动计算，也可按式（1）计算残留量：
式中：
X--样品中化合物残留量，单位为微克每升（ug/1L)；C 一由标准工作曲线得到的试样溶液中化合物含量，单位为微克每升（μg/L）：m一样品溶液所代表的试样体积，单位为毫升（mL）. 样品的最终定容体积，单位为毫升（mL）；
8测定低限和回收率
8.1测定低限
本方法基质中艾玛菌素测定低限均为0.5μg/L
8.2回收率
添加浓度水平分别为0.5pg/L.、1.0pg/L和2.0μg/L时，不同基质中艾玛菌素回收率数据参见附录D.
