中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1201-2003
Protocol of PCR for detection of genetically modified feed
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本都准出国家认证认可室警管理委员会孤出并日口.
起章. 本标准由中华人民共和国深制出人境检验检疫局负贵起草，中医进口商品检验技术张究所参加本标准主要配事人：章性明、王联、余道登，康林，场伟东、金夏忠、图额禁、陈枝、独宝梁， 本标理系百次发有的检验检胶行业标准.
植物性饲料中转基因成分定性PCR 检测方法
1围
本标难现定了领料中转基因或分的定在位测方法.
本标准中定性验测方岳适用于以转基固大豆RonupRey转基四王来（BT11 BT176.MON810 T14/25.CBH351)秘转基国注聚（扰草甘操除草到、抗草丁算除草列、性不育1为压料 加工的饲料中转基医成分的定性检测.
2频范性引用文件
有的修改单（不包括歌谈的内容）成修改版均不适合于本标准-给面，数励模据本标准送成协汉的各方哥 下列文持中的条款通过本标准的引用育成为本样准的条款，凡是出明日期的引用文件-其随后断究是否可使用达些文件岭最新级本.凡是不性明日期的引用文件，其整新航本运合于本标准.
SN/T8798进出口卖网科检检被名词术通SN/T1193签国分折橙為实验室技水资求 SN/T1194桂物及其产品中转基因或分检姆抽标和制排方法SN/T1196王术中转基因或分定性PCR检测方岳 SN/T1197维策籽中特基因成分定性PCR检男方法SN/T1204提物及其工产品中转基四成分实时荧光PCR定性检验方快
3承请、定文和路请
下列求语，定文到船略通适用于本标事.
3. 1邦高医S料grneticaly modified feed (GMF) 通过基因重组技术获特药基四改疫生物基工南底的岗科.
聚合期式成应poyeerase chain reaction（PCR)
链上的一段工补序列发生遇火，楼奢在DNA聚合的值优下以民静dNTP为表物，健退火引物得以班 硬板DNA先经高指变性为单-在适发的温度下和级带逐范中.阿条物分别与换板DNA期条伴如此反复变性，退火和DNA合或错环，张位于两费引物序别之即的DNA片段量儿何倍数护增.
定性椎划quelltative etectioa
对样品中转基因成分进行校测以判定碳样品是否为转基因产品.
3. 4
3. 4. 1G5Ogenetieally modified organiem.持基四生物 3. 4. 2CaMV 35S 35S peomoter lfrom cxuiflower moit virux 花邮菜花病 3SS 官幼子.
SN/T
3. 4. 3 NOS;serminator o nopalint synthase gene from Agrolucteriam rame feriens-浆据 于农F 3. 4. 4CP4 EPSPS 5-enolpyruvylshilsimane-3-phosphate synthase geme 5-再单酸-3-确股合成脂基图 3.4.5RRS，Roumdup Resdy”Soybean，费国Monsanto公时转基因抗限草大互.3. 4.6IVR Invertase 1 grme from maire.王苯转化族 1 基显 3. 4. 7Ngt：neomyein-2phophotranserase gen.新每案3'确胶转移期基因 3.4. 8 CrylA(b);s xyntheic gete emcoded the first 648 amino acids . inoecticidal-active trunceted product identical so that of sryfAca1 gene of Beritlar thringieuser sabsp Karstaibi stesin HD-1 苏艺金异也杆医墙晶蛋台（Cry)1型毒素抗点基器
4原理
片程的引物和进行PCR扩地根据实验结果，定碳树科是否带有外图基因成分， 转基园保料定性检测是利用外面基因与银物本身基因的不网，通试设计只能扩增务淘基国中DNA
5武查
5. 1 SDS 提R液:1. 5%SDS EDDTA-Ne 100 mmol/L(pH &.0) Tris-HCI 29 mmol/L(pH & 0) 报
(NaCI) 500 mmal/L 5.2Trix组和前. 5.3三氧甲烧，5.4异皮， 5.5异丙，5.610%乙醇. 5.7RNA 9(10 mg/mL).5.8原. 5.9三轻甲基氨基甲烷（T），5.10冰乙酸、 5.11 EDTA(PH8.0) 5.12 10×PCR暖冲坡. 5.13 dNTP.5. 14Toq DNA 聚合酶 5. 15 腹化乙键(30 mg/mL) 5. 16 100 bp ladder DNA Marker 5.18TAE（S0X）堰冲液， 5.17R览5.1910×加样级净双：0.25%该酯蓝.40%要糖.
6饮替设备
6.9送显干绿箱. 6.10 pH it.6. 11B:0 1 xL 0 5 μl 2 μL 10 μL 20 μl 100 μL. 200 μL 1 000 μl、 6.12紫外可见分光光度计，6.13纯水板，6. 16 高心管.1.5 m1. 2.0 mL 6.18 PCR 仅. 6. 17 Tip 9. 1 μL~10 pL5 μL~200 pL.100 pL~500 FG 6.19电仪.6.20配配分析成雅系统.
6.7低围冰箱，（-40℃）.
6.8别冰机，
6.14高压清毒销.
6. 15 PCR 0. 2 mL. 0.5 mL
7防污染施
植物性闭料转基网成分定性PCR检测方法中炭要求的实验室防污乘热施陵所SN/T1193规定的方梁执行.
8抽样与制样
物性饲料转基因成分定性PCR检西方法中排品的推祥和制祥技班SN/T1194规定的方执行.
9DNA提取及浓里测定
9 1 DNA 提取
9.1.1改典 SD5 方法
a)称取样品g.在硕体中加人液氮到至样品是0.5mm左右的粉末.b）称取300mg磨碎的样品-活速转人2mL离心管中-加1.5mL65℃SDS提取缓呼度.观匀. 放人65C水浴编中水塔15min.d)t RNase(资排度 19 μg/mL) 37°C水胎 30 min c)15 000 g其心15 min.取上 1 ml e）加人等体积Tri他和龄充分情句.g）15 000g商10 =n，取上调 400pL 加人600pL三氧甲级-异成排（V V241)滋匀. (V : V=24 1)g.h)15 000g高心5 min取上措波300xL加人 400 μL丙群-轻轻混匀，冰能 10min 1）13000高心5min原次奖开用1mL70%乙醇清携三次，）前去乙醇-高心、用吸管尽可能去到余乙.千业后加人100p1去离子水将解DNA k)低富(20C)探存、
9.1.2试别查法
不网基因组DNA提取试剂盘，使用时按操作说研书提作.
9.2DNA派度到定
样品DNA用量外分光光度计测定260mm和280nm处吸收值分别计算核酸的线度和准度，计算
