中华人民共和国国家标准
GB 7918.3-87
化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群
Standardmethods ofmicrobiologicalexamination for cosmeticsFecal coliforms
中华人民共和国卫生部 发布
中华人民共和国国家标准
UDC 668.58:576 - 85.07
化妆品微生物标准检验方法 粪大肠菌群
GB 7918.3-87
Standard methods of mierobiological examination for cosmeticsFecal coliforms
能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险，因此类大肠菌被列为重要的卫生指标菌. 粪大肠菌群细菌来源于人和温血动物的粪便.检出粪大肠菌群表明该化妆品已被粪便污染，有可
1方法提要
根据粪大肠菌群所具有的生物特性，如革兰氏阴性无芽胞杆菌在44C培养24~48h能发酵乳糖产
2培养基和试剂
2.1乳糖胆盐培养基
成分：蛋白陈 猪胆盐 20g乳糖 5g 5g0.4%溴甲酚紫水溶液 2.5ml蒸水 1000ml
加一个小倒管）.115℃（10Ib）20min灭菌. 制法：将蛋白陈、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀，分装试管（每支试管中
2.2双倍浓度乳糖胆盐培养基
按上述乳糖胆盐培养基成分，蒸水量不变，其他成分量加倍.
2.3伊红美蓝（EMB）琼脂
成分：蛋白陈 乳糖 10g 10g磷酸氢二钾 2g琼脂 20g2%伊红水溶液 20ml0.5%美蓝水溶液 蒸水 13ml 1000ml
制法：先将琼脂加到900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾蛋白膨，混匀，使之溶解.再以蒸端水补足至1000ml，校正pH值为7.2~7.4，分装于烧瓶内，121C（15Ib）15min高压灭菌备用.临用时加入乳糖并加热融化琼脂.冷至60C左右以无菌手续加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀，倾注平 且备用.
2.4蛋白陈水（作靛基质试验用）
成分：蛋白脉（或胰蛋白陈） 20g氯化销 蒸馏水 5g 0001
制法：将上述成分加热熔化，调pH值为7.0~7.2.分装小试管，高压灭菌121C（151b）15min.
2.5靛基质试剂
柯凡克试剂：将5g对二甲氨基苯甲醛溶解于75ml戊醇中，然后缓慢加入浓盐酸25ml.
试验方法：接种细菌于蛋白陈水中，于44C培养24h.沿管壁加柯凡克试剂0.3~0.5ml，轻摇试管，阳性者于试剂层显深玫瑰红色.
注：蛋白陈应含有丰富的色氨酸，每批蛋白陈买来后应先用已知菌种鉴定后方可使用.
2.6革兰氏染色法
2.6.1染液制备
2.6.1.1结品紫染色液：
结晶紫 1g95%酒精 1%草酸铵水溶液 80ml 20m1
将结晶紫溶于酒精中，然后与草酸铵溶液混合.
2.6.1.2革兰氏碘液：
碘 1g碘化钾 蒸缩水 2g
将碘与碘化钾先进行混合，加入蒸馏水少许，充分振播，待完全溶解后，再加蒸水至300ml.
2.6.1.3脱色液：95%乙醇.
2.6.1.4复染液：
沙黄复染液：
沙费 0.25g95%酒精 10m1蒸水 06
将沙黄溶解于酒精中，然后用蒸缩水稀释，
b.稀石碳酸复红液：称取碱性复红10g，研细，加95%乙醇100ml，放置过夜，滤纸过滤.取该液10ml，加5%石碳酸水溶液90ml混合，即为石碳酸复红液，再取此液10ml加水90ml，即为稀石碳酸复红液.
2.6.2染色法
2.6.2.1将涂片在火焰上固定，滴加结品紫染色液，染1min，水洗.
2.6.2.2滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗.
2.6.2.3滴加95%酒精脱色，约30s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，脱色10s，水洗.
2.6.2.4滴加复染液.复染1min，水洗，待干，镜检.
2.6.3染色结果
革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色.
注：如用1：10稀释石碳酸复红染色液作复染液，复染时间仅货16，
3仅器
3.1恒温水浴或隔水式恒温箱：44C.
3.2温度计，3.4载玻片. 3.3显微镜.3.5接种环.3.6电炉.3.7锥形瓶.3.8试管.3.9小倒管. 3.10pH计或pH试纸，3.11高压消毒锅.3.12灭菌吸管.3.13灭菌平血.
4操作步骤
4.1取10ml1：10稀释的样品，加到10ml双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44C培养箱中培养24~48h，如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性，
接种到蛋白陈水中.置44C培养24h. 4.2如产酸产气，划线接种到伊红美蓝琼脂平板上，置37C培养18~24h.同时取该培养液1~2滴
经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长.大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，圆形，边缘整齐，表面光滑湿润，常具有金属光泽，也有的呈紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落.亦常为大肠菌群，均应注意挑选.
4.3挑取上述可疑菌落，涂片作革兰氏染色镜检，
4.4在蛋白陈水培养液中，加入靛基质试剂约0.5ml，观察靛基质反应.阳性者液面呈玫瑰红色：阴性反应液面星试剂本色，
5检验结果报告
大肠菌群. 平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阴性短杆菌，靛基质试验阳性，则可报告被检样品中检出粪
附加说明：
本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所归口，本标准由“化妆品微生物标准检验方法”起草小组起草.本标准主要起草人周淑玉.本标准由中国预防医学科学院环境卫生监测所负贵解释.
