中华人民共和国国家标准
GB/T 15670.9-2017部分代替GB/T15670-1995
Toxicological test methods for pesticides registrationPart 9:Skin sensitisation test
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
GB/T15670《农药登记毒理学试验方法》分为以下部分：第1部分：总则：第2部分：急性经口毒性试验霍恩氏法；第3部分：急性经口毒性试验序贯法； 第4部分：急性经口毒性试验概率单位法；第5部分：急性经皮毒性试验；第6部分：急性吸人毒性试验；第7部分：皮肤刺激性/腐蚀性试验：第8部分：急性眼刺激性/腐蚀性试验； 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验；第10部分：短期重复经口染毒（28天）毒性试验；第11部分：短期重复经皮染毒（28天）毒性试验；第12部分：短期重复吸人染毒（28天）毒性试验：第13部分：亚慢性毒性试验： 第14部分：细菌回复突变试验：一第15部分：体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验；-一第16部分：体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验；第18部分：嘀齿类动物显性致死试验： 第17部分：哺乳动物精原细胞/精母细胞染色体畸变试验；一第19部分：体外哺乳动物细胞染色体畸变试验：一第20部分：体外哺乳动物细胞基因突变试验：第23部分：致畸试验； 第22部分：体外哺乳动物细胞DNA损害与修复/程序外DNA合成试验：第24部分：两代繁殖毒性试验；第25部分：急性迟发性神经毒性试验；第26部分：慢性毒性试验：第27部分：致癌试验； 第28部分：慢性毒性与致癌合并试验；第29部分：代谢和毒物动力学试验.本部分为GB/T15670的第9部分.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分与GB/T15670-1995的皮肤变态反应（致敏）试验部分相比主要变化如下： 本部分部分代替GB/T15670-1995《农药登记毒理学试验方法》.修改和调整了标准的总体结构和编排格式；一增加了一些章节内容（见第1章、第2章、第3章、第5章、6.1、6.2、6.3.3.4、6.3.3.6、6.4、6.5和一修改了对实验动物的要求（见6.3.1，1995年版的7.3）； 第7章）；
GB/T 15670.9-2017
修改了对阳性和阴性对照组设置的要求（见6.3.3.5，1995年版的7.5.2）；修改了结果评定的内容（见6.3.4，1995年版的7.6）：一增加了原鼠最大值试验和小鼠局部淋巴结分析试验两个试验方法（见6.4、6.5）.本部分由中华人民共和国农业部提出.本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司归口. 本部分起草单位：农业部农药检定所.本部分主要起草人：张宏伟、张丽英、曲亮费、陶传江.本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GB/T 156701995
农药登记毒理学试验方法 第9部分：皮肤变态反应（致敏）试验
1范围
GB/T15670的本部分规定了皮肤变态反应（致敏）试验的基本原则、方法和要求.本部分适用于为农药登记面进行的皮肤变态反应（致敏）试验.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB14925实验动物环境及设施
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
皮肤变态反应skin sensitization
过敏性接触性皮炎allergic contact dermatitis
皮肤对一种物质产生的免疫源性皮肤反应.人类这种反应可能以瘙痒、红斑、丘疹、水疱、融合水疱为特征，动物的反应不同，可能只见到皮肤红斑和水肿.
诱导接触induction exposure
机体通过接触受试物而诱导出过敏状态的试验性暴露.
机体通过接触受试物而诱导出过敏状态所需的时间，一般至少1周.
激发接触challengeexposure
机体接受诱导暴露后，再次接触受试物的试验性暴露，以确定皮肤是否会出现过敏反应.
刺激指数stimulation index：SI
）基脱氧胸腺嘧啶昔或1-碘苷的结合值的比值（率）.
4试验目的
确定重复接触受试物对哺乳动物是否可引起皮肤变态反应及其程度.
5试验概述
局部封闭涂皮试验（Buehler test BT）和豚鼠最大值试验（guinea pig maximisation test GPMT）是实验动物通过多次皮肤涂抹（诱导接触）或皮内注射受试物10d~14d（诱导阶段）后，给予激发剂量的 受试物，观察实验动物，并与对照动物比较对激发接触受试物的皮肤反应强度.
小鼠局部淋巴结分析试验（locallymph nodeassay，LLNA）是通过耳部给予实验动物受试物，引起淋巴结的淋巴细胞增生，淋巴细胞增生与受试物剂量（过敏程度）成比例.利用放射性标记方法，测定试验组与对照组淋巴细胞的标记率，并进行对比，获得刺激指数，评价致敏强度.
6试验方法
6.1实验动物和饲养环境
局部封闭涂皮试验和原鼠最大值试验宜选用健康、成年雄性或雌性豚鼠，雌性动物应选用未妊娠和未经产的.
鼠.体重变异不超过平均体重的土20%.除非有充分证据说明其他的种系或性别在此试验中对结果没 小鼠局部淋巴结分析试验宜选用健康、8周～12周雌性未妊娠和未经产的CBA/Ca或CBA/J小有影响，原则上不采用其他的种系或性别动物.
实验动物饲养环境和条件应符合GB14925的有关规定.选用常规何料，饮水不限制，豚鼠需注意补充适量Vc.
6.2动物试验前准备
试验前动物在实验动物房环境中至少检疫、适应5d时间.将动物随机分为受试物组和对照组，按所选用的试验方法，选择适当部位给动物备皮（去毛），避免损伤皮肤.小鼠局部淋巴结分析试验不要采用耳部标记记号的方式.试验开始和结束时应记录动物体重.
无论在诱导阶段或激发阶段均应对动物进行全面观察，包括全身反应和局部反应，并作完整记录.
6.3局部封闭涂皮试验（BuehlerTest，BT）
6.3.1动物数
试验组至少20只，对照组至少10只.
6.3.2剂量水平
诱导接触受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度，激发接触受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度.试验浓度水平可以通过少量动物（2只～3只）的预试验获得.
水溶性受试物可用水或用无刺激性表面活性剂作为溶剂非水溶性受试物如脂溶性受试物可用食用油或其他无刺激性、无致敏性的表面活性剂作溶剂，当受试物在诱导接触中用80%乙醇做溶剂时，则在激发接触中应用丙酮作溶剂.
6.3.3试验步骤
6.3.3.1动物的准备
试验前约24h，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为4cm²~6cm².
