中华人民共和国国家标准
GB/T 19524.2-2004
Determination of mortality of ascarid egg in fertilizers
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出.本标准由农业部微生物肥料质量监督检验测试中心负责起草. 本标准主要起草人：姜昕、李俊、沈德龙、曹风明、李力.
肥料中虫卵死亡率的测定
1范围
本标准规定了肥料中朝虫卵死亡率的测定方法.
2测定方法原理
将碱性溶液与肥料样品充分混合，分离虫卵，然后用密度较朝虫卵密度大的溶液为漂浮液，使朝虫卵漂浮在溶液的表面，从而收集检验.
3仪器设备
往复式振荡器：天平：离心机：金属丝圈（约1.0cm）：高尔特曼氏漏斗：微孔火棉胶滤膜（435mm、孔径0.65μm~0.80pm）；抽滤瓶；真空泵；显微镜；恒温培养箱及其他试验室常用仪器、物品等.
4试剂
本标准所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯.
a）50.0g/L氢氧化钠溶液；b）饱和硝酸钠溶液（密度1.38~1.40）；c)500mL/L甘油溶液；d）20mL~30mL/L甲醛溶液或甲醛生理盐水.
5检验步骤
5.1样品处理
称取5.0g~10.0g样品（颗粒较大的样品应先进行研磨），放于容量为50mL离心管中，注人氢氧化钠溶液25mL～30mL，另加玻璃珠约10粒，用橡皮塞塞紧管口，放置在振荡器上，静置30min后，以 200r/min~300r/min频率振荡10min~15min，振荡完毕，取下离心管上的橡皮塞，用玻璃棒将离心管中的样品充分搅匀，再次用橡皮塞塞紧管口，静置15min~30min后，报荡10min~15min.
5.2离心沉淀
从振荡器上取下离心管，拔掉橡皮塞，用滴管吸取蒸馏水，将附着于橡皮塞上和管口内壁的样品冲入管中，以2000r/min~2500r/min速度离心3min~5min后，弃去上清液.然后加适量蒸馏水，并 用玻璃棒将沉淀物搅起，按上述方法重复洗涤三次.
5.3离心漂浮
往离心管中加入少量饱和硝酸钠溶液，用玻璃棒将沉淀物搅成精状后，再徐徐添加饱和硝酸钠溶液，随加随搅，直加到离管口约1cm为止，用饱和硝酸钠溶液冲洗玻璃棒，洗液并入离心管中，以 2 000 r/min~2 500 r/min速度离心 3 min~5 min.
用金属丝圈不断将离心管表层液膜移于盛有半杯蒸馏水的烧杯中，约30次后，适当增加一些饱和硝酸钠溶液于离心管中，再次搅拌、离心及移置液膜，如此反复操作3次～4次，直到液膜涂片在低倍显微镜下观察不到虫卵为止.
5.4抽滤镜检
将烧杯中混合悬液，通过覆以微孔火棉胶滤膜的高尔特曼氏漏斗抽滤，若混合悬液的浑浊度大，可更换滤膜.
抽滤完毕，用弯头镊子将滤膜从漏斗的滤台上小心取下，置于载玻片上，滴加二、三滴甘油溶液，于低倍显微镜下对整张滤膜进行观察和朝虫卵计数.当观察有嘲虫卵时，将含有虫卵的滤膜进行培养.
5.5培养
在培养Ⅲ的底部平铺一层厚约1cm的脱脂棉，脱脂棉上铺一张直径与培养Ⅲ相适的普通滤纸，为防止霉菌和原生动物的繁殖，可加人甲醛溶液或甲醛生理盐水，以浸透滤纸和脱脂棉为宜.
将含虫卵的滤膜平铺在滤纸上，培养Ⅲ加盖后置于恒温培养箱中，在28C～30C条件下培养，培养过程中经常滴加燕馏水或甲醛溶液，使滤膜保持潮湿状态.
5.6镜检
培养10d~15d，自培养Ⅲ中取出滤膜置于载玻片上，滴加甘油溶液，使其透明后，在低倍显微镜下查找虫卵，然后在高倍镜下根据形态，鉴定卵的死活，并加以计数.镜检时若感觉视野的亮度和膜的透明度不够，可在载玻片上滴一滴蒸馏水，用盖玻片从滤膜上刮下少许含卵滤渣，与水混合均匀，盖上盖玻片进行镜检.
5.7判定
凡含有幼虫的，都认为是活卵，未瓣化或单细胞的都判为死卵.
5.8结果计算
结果计算见式（1）：
K 100(N N)/N; *...* （1)
式中：
K一朝虫卵死亡率，%：N-镜检总卵数：N---培养后镜检活卵数.
