中华人民共和国国家标准
GB/T20189-2006
Determination of ractopamine in animal feeds-High performanceliquid chromatographic method
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准是在参阅了国内外大量文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了高效液相色谱-荧光检测法.
本标准由农业部和全国何料工业标准化技术委员会提出并归口.
本标准负责起草单位：中国农业大学动物医学院、国家饲料质量监督检验中心（北京）.
本标准主要起草人：沈建忠、张素霞、苏晓鸥、徐百志、丁双阳、沈张奇、李兰.
饲料中莱克多巴胺的测定 高效液相色谱法
1范围
本标准规定了检测动物饲料中莱克多巴胺含量的高效液相色谱（HPLC）方法.
本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和添加剂预混合何料中莱克多巴胺含量的测定.本方法检测限为0.5μg/g.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法
GB/T14699.1饲料采样
3方法原理
用酸性甲醇-水提取试样中莱克多巴胺，二氯甲烷和正己烷萃取净化，以2%冰乙酸-乙晴-水作为流动相，用高效液相色语-荧光检测法分离测定.
4试剂和溶液
除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T6682一1992二级水的规定.4.1乙晴：色谱纯.4.2甲醇：色谱纯.4.3甲醇. 4.4二氯甲烷.4.5正已烷.4.6乙酸溶液：取5mL冰乙酸加水至250mL.4.7提取液：取900mL甲醇（4.3）加水到1000mL，再加2mL浓盐酸，混匀.4.8流动相：取320mL乙晴（4.1）加水到1000mL，再加20mL冰乙酸和0.87g戊烷磺酸钠4.9莱克多巴胺标准贮备液：准确称取莱克多巴胺标准品（纯度≥99%）0.1000g，置于100mL容量 (CHOSNaHO），混匀.瓶中，用甲醇溶解，定容，其浓度为1000μg/mL的储备液，置4C冰箱中，可保存3个月.4.10莱克多巴胺标准工作液：分别准确吸取一定量的标准贮备液（4.9），置于10mL容量瓶中，用2%冰乙酸稀释、定容，配制成浓度为0.01μg/mL 0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5pμg/mL、1.0pg/mL、2.0μg/mL的标准溶液，分别进行HPLC检测.
5仅器和设备
实验室常用仪器，设备及以下设备.
GB/T 20189-2006
5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器.5.2离心机.5.3振荡器. 5.4玻璃具塞三角瓶：250mL.5.5微孔滤膜：0.45ym.5.6漩涡混合器.
6试样制备
按GB/T14699.1规定，取有代表性的样品，四分法缩减取约200g，经粉碎，全部过1mm孔筛，混匀装入磨口瓶中备用.
7测定步骤
7.1试样提取
称取一定量的试样（10.0g配合饲料，或5.0g浓缩饲料，或1.0g添加剂预混合何料），置于250 mL玻聘具塞三角瓶中，加人100mL提取液（4.7)，振荡30min.静止20 min，取上清液1mL于 离心管中，于45C下氮气吹干，加人4mL乙酸溶液（4.6）溶解，涡动30s~60s，加人2mL二氯甲烷（4.4）萃取，涡动30s，3000r/min离心10min，取上层乙酸相于另一离心管中，加人2mL正已烷（4.5），涡动30s，1000r/min离心5min，弃去上层，用0.45um微孔有机滤膜过滤作为试样制备液，供高效液相色谐分析.
7.2HPLC色谱条件
色谱柱：C柱，长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或相当者.柱温：室温，流动相流速：1.0mL/min. 流动相：见4.8.激发波长，226nm.发射波长：305nm. 进样量：50gL.
7.3HPLC测定
取适量试样制备液（7.1）和相应浓度的标准工作液（4.10)，作单点或多点校准，以色谱峰面积积分值定量，当分析物浓度不在线性范围内时，应将分析物稀释或浓缩后再进行检测.
8结果计算与表述
8.1试样中莱克多巴胺的含量X，以质量分数（gg/g)表示，按式（1)计算：
式中：
8.2测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留至小数点后1位.
9精密度
9.1重复性
实验室内平行测定间的变异系数不大于10%.
9.2再现性
实验室间测定的变异系数不大于20%.
