中华人民共和国国家标准
GB/T 20741-2006
Method for the determination of dexamethasone residuesin livestock and poultry muscles-LC-MS-MSmethod
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布
前言
本标准的附录A和附录B为资料性附录.本标准由中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局提出. 本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口.本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学.本标准主要起草人：庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、吴艳萍、李金、连玉晶、林忠.本标准系首次发布的国家标准.
畜禽肉中地塞米松残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的液相色谐-申联质谱测定方法.本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地塞米松残留量的测定.本标准的方法检出限；0.2μg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6379.1测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第1部分：总则与定义(GB/T 6379. 1-2004 ISO 5725-1;1994 IDT)
GB/T6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法（GB/T6379.2-2004，ISO5725-2：1994，IDT）
GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T 6682-1992，neq ISO 3696：1987)
3原理
动物组织样品中加入内标甲基强的松龙（6-alpha-methylprednisolone），样品用乙酸乙酯提取，提取液浓缩后，经过BOND-ELUTSi固相萃取柱净化，液相色谱-申联质谱仪测定，内标法定量.
4试剂和材料
水为GB/T6682规定的一级水.4.1甲醇：色谱纯.4.2乙晴：色谱纯.4.3乙酸乙酯：色谱纯. 4.4甲酸：优级纯.4.5正已烷：色谱纯，4.6丙酮：色谱纯.4.7丙酮-正己烷溶液I：丙酮正已烷（28）.4.9无水硫酸钠：分析纯，在650C马弗炉中灼烧6h.贮存于干燥器中. 4.8丙酮-正己烷溶液Ⅱ：丙酮正已烷（4十6）.4.10氢氧化钠：优级纯.4.11氢氧化钠溶液：0.3mol/L.称取12g氢氧化钠，用水溶解，定容至1000ml.4.13地塞米松标准储备溶液：1.0mg/mL.准确称取100mg地塞米松标准物质，用甲醇溶解，定容 4.12地塞米松和甲基强的松龙标准物质：纯度≥99%.至100mL.配成的标准储备液可在温度低于一20C冰箱中保存三个月.4.14甲基强的松龙标准储备溶液：1.0mg/mL.准确称取100mg甲基强的松龙标准物质，用甲醇溶
解，定容至100mL.配成的标准储备液可在温度低于一20C冰箱中保存三个月.4.15地塞米松标准工作溶液：吸取适量的地塞米松标准储备溶液，用甲醇分别配成5pg/mL和0.050μg/mL两种浓度的标准工作溶液.配成的标准工作溶液可在温度低于一20C冰箱中保存一 个月.4.16地塞米松基质标准工作溶液：分别吸取适量的地塞米松标准工作溶液，用空白样品提取液分别配成浓度分别为1.0ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、50.0 ng/mL的基质标准工作溶液.基质标准工作溶液应现用现配.4.17甲基强的松龙标准工作溶液：吸取适量的甲基强的松龙标准储备溶液，用甲醇分别配成5μg/mL 和0.5μg/mL两种浓度的标准工作溶液.配成的标准工作溶液可在温度低于一20C冰箱中保存一个月.4.18BOND-ELUTSi固相萃取柱或相当者：500mg，3mL.使用前用2mL丙酮正已烷（28）预4.19滤膜：0.20gm. 处理，保持柱体湿润.
5仪器
5.1液相色谱-串联质谱仪：配有大气压化学电离源（APCI）.5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g. 5.3液体混匀器.5.4固相萃取真空装置.5.5均质器.5.6振荡器.5.8真空泵：真空度应达到80kPa， 5.7具塞玻璃离心管：50mL.5.9离心机5.10旋转蒸发器.5.11氮气浓缩仪.5.12样品管：10mL. 5.13梨形瓶：150mL.5.14简形漏斗，
6试样的制备与保存
6.1试样的制备
从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内.密封作为试样，注明标记.在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化.
6.2试样保存
将试样于-18C冷冻保存.
7测定步骤
7.1提取
(6-alpha-methylprednisolone）标准工作溶液 20μuL，加入10 mL 0.3 mol/L氢氧化钠溶液，在液体混匀 称取5g试样（精确到0.01g）置于50mL具塞玻璃离心管中，加人0.5μg/mL内标甲基强的松龙5min，取上清液过盛有25g无水硫酸钠的筒形漏斗至梨形瓶中.再用20mL乙酸乙酯提取一次，过无
水硫酸钠筒形漏斗，合并上清液，用旋转蒸发器于45C水浴上减压蒸发至近干，用1mL乙酸乙酯和5mL正已烷溶解.
7.2净化
将提取液移至经预处理的BOND-ELUTSi固相萃取柱中，用2mL丙酮正已烷（46）洗涤梨形瓶和萃取柱，弃去全部流出液.在65kPa的负压下，减压抽干1min，用6mL丙酮正已烷（46）以≤3mL/min流速洗脱，收集洗脱液于10mL样品管中，用氮气浓缩仪吹干，用1mL流动相溶解，过0.20μm滤膜，供液相色谱-申联质谱仪测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱条件
a）色谱柱：Atlantis dC，3pm，150mm×2.1mm（内径）或相当者；b）流动相：乙晴0.1%甲酸水（5050)；c）流速：200L/min：d）柱温：30C； 进样量：20 ul.e）
7.3.2质谱条件
a）离子源：大气压化学电离源（APCI）：b）扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测：d) 雾化电流：3.00μA； 气帘气压力：0.138MPa；e) 雾化气压力：0.276MPa；g) 辅助加热气压力：0.138MPa；h) 离子源温度：250C；i）定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表1.
表1地塞米松和甲基强的松龙的质谱参数
名称 碰撞能量/V定性离子对（m/2） 定量离子对（m/2） 去族电压/V地塞来松 393 2/373 2 393 2/355 2 393 2/373 2 21 21 14 17375 2/161. 2 16 26甲基强的检龙 375 2/339 2 375. 2/161. 2 16 9
7.3.3液相色谱-串联质谱测定
在仪器最佳工作条件下，采用内标法进行定量测定，内标为甲基强的松龙，为减少基质的影响，定量采用基质标准工作溶液进样，样品溶液中地塞米松的响应值应在仅器测定的线性范围内.地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图参见图A.1.在上述色谱条件和质谱条件下，地塞米松和甲基强的 松龙参考保留时间见表2.
表2地塞米松和甲基强的松龙的参考保留时间
名称 保留时间/min地塞米松 3 75甲基强的松龙 3 48
本方法的添加回收率数据参见附录B.
