中华人民共和国国家标准
GB/T21866-2008
Test method and effect for antibacterial capability of paints film
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由中国石油和化学工业协会提出.
本标准由全国涂料和颜料标准化技术委员会归口.
本标准起草单位：中国建筑材料科学研究总院、中化建常州涂料化工研究院、广东省微生物分析检测中心、深圳市立新纳米应用技术有限公司、奥麒化工（中国）有限公司、上海富臣化工有限公司、深圳市展辰达化工有限公司、北京展辰化工有限公司、华夏贝能（北京）生态科技有限公司、广东巴德士化工有限公司、深圳方浩实业有限公司.
本标准主要起草人：王静、冀志江、赵玲、陈仪本、曹文、刘伟、叶荣森、朱胜美、严修才、陈延东、王继梅、丁楠.
抗菌涂料（漆膜）抗菌性测定法和抗菌效果
1范围
本标准规定了建筑和木器用抗菌涂料（漆膜）抗细菌性能的测定方法及抗细菌效果.其他涂料（漆膜）抗细菌性能的测定也可参照使用.
2规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T1250极限数值的表示方法和判定方法GB/T1727漆膜一般制备法 GB/T3186色漆、清漆和色漆与清漆用原材料取样（GB/T3186-2006，1SO15528：2000.1DT）GB/T4789.2食品卫生微生物学检验菌落总数测定GB/T9278涂料试样状态调节和试验的温湿度（GB/T9278-2008，ISO3270：1984，IDT）GB19258紫外线杀菌灯 GB19489实验室生物安全通用要求
3术语和定义
3. 1抑菌bacteriostasis 抑制细菌、真菌、霉菌等微生物生长繁殖的作用.
3. 2杀菌sterilization杀死细菌、真菌、霉菌等微生物营养体和繁殖体的作用.
抗菌antibacterial抑菌和杀菌作用的总称.
3. 4抗菌涂料antibacterial coating具有抗菌作用的涂料.
4方法简述
本方法通过定量接种细菌于待检验样板上，用贴膜的方法使细菌均匀接触样板，经过一定时间的培养后，检测样板中的活菌数，并计算出样板的抗细菌率.
5试验条件
5.1实验室要求
抗菌试验的实验室应符合GB19489规定的实验室生物安全管理和设施条件要求.
5.2主要设备
5.2.1恒温培养箱（37士1）C、冷藏箱（0~5）C、超净工作台、压力蒸汽灭菌锅、电热干燥箱、天平（精度0. 01 g).
5.2.2灭菌平Ⅲ、灭菌试管、灭菌移液管、接种环、酒精灯.
5.3主要材料
5.3.1覆盖膜
聚乙烯薄膜，标准尺寸为（40±2）mm×（40±2）mm、厚度为（0.05~0.10）mm.用70%乙醇溶液浸泡10min，再用洗脱液冲洗，自然干燥.
5.3.2培养基
5.3.2.1营养肉汤培养基（NB）
牛肉膏 10.0 g 5.0 g蛋白陈 氯化钠 5.0 g
制法：取上述市售材料按比例依次加人1000mL蒸馏水中，加热溶解后，用0.1mol/LNaOH溶液（分析纯）调节pH值为7.0~7.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内.121C灭菌30min.
5.3.2.2营养琼脂培养基（NA）
1000mL营养肉汤（NB）中加入15g琼脂，加热熔化，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值为7.0~7.2.分装后置压力蒸汽灭菌器内.121C灭菌30min.
5.3.3试剂
5.3.3.1消毒剂
70%乙醇溶液.
5.3.3.2洗脱液
含0.85%NaCl的生理盐水.为便于洗脱可加人0.2%无菌表面活性剂（如吐温80）.用0.1mol/LNaOH溶液或0.1mol/LHCl溶液调节pH值为7.0~7.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内，121C灭菌30 min.
5.3.3.3培养液
营养肉汤（NB）/生理盐水溶液.建议用于大肠杆菌的培养液浓度为1/500，金黄色葡萄球菌的培养液浓度为1/100，为便于细菌分散可加人0.2%无菌表面活性剂（如吐温80）.用0.1mol/LNaOH溶液或0.1mol/LHC1溶液调节pH值为7.0~7.2.分装后置压力蒸汽灭菌器内，121C灭菌30min
5.3.4检验菌种
a）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureas）AS1.89b）大肠埃希氏菌（Escherichia coli）AS1.90根据产品的使用要求，可增加选用其他菌种作为检验菌种.
注：实验用菌种应来源于国家级菌种保藏管理中心.
5.4样板
5.4.1阴性对照样板
的空板. 编号A，是未放任何试板的直径为90mm或100mm的灭菌培养平Ⅲ中50mm×50mm面积大小
5.4.2空白对照样板
编号B，是未添加抗菌成分的涂料试板，此对照涂料样品要求不含有任何无机或有机抗菌剂、防霉剂、防腐剂.
注：空白对照样板可在中国建筑材料科学研究总院得到.
5.4.3抗菌涂料试验样板
编号C，是添加抗菌成分的涂料试板.
5.4.4涂料试板制备
按GB/T3186的规定进行取样.制备试板所用底材通常应是实际使用底材（例如水泥板、本板、金涂剧第二遍，涂膜总厚度湿膜小于100um.样板应平整、无锈、无油污等.若以木板作为试板底材，则要 属板、塑料板、贴膜纸板）.按照GB/T1727要求制作涂膜，涂料的施涂一般为两次涂剧，第一遍表干后求漆膜封住整个木板，试板涂剧后按照GB/T9278规定的条件干燥7d，保证试板涂膜完全干后再用于实验.
将涂刷好的试板裁成50mm×50mm大小的试板10片，在试验前应进行消毒，建议用超净工作台中紫外灭菌灯消毒处理试板5min，备用.
6检验程序
6.1菌种保藏
将菌种接种于营养琼脂培养基（NA）斜面上，在（37土1）C下培养24h后，在（0~5）C下保藏（不得超过1个月），作为斜面保藏菌种.
6.2菌种活化
使用保藏时间不超过2周的菌种，将斜面保藏菌种转接到平板营养琼脂培养基上，在（37土1）C下培养（18~20）h，试验时应采用连续转接2次后的新鲜细菌培养物（24h内转接的）.
6.3菌悬液制备
用接种环从6.2培养基上取少量（刮1～2环）新鲜细菌，加入培养液中，并依次做10倍递增稀释液，选择浓度为（5.0~10.0)×10°cfu/mL的菌液作为接种菌液，按GB/T4789.2的方法操作.
6.4样品试验
分别取0.4mL~0.5mL试验用菌液（6.3）滴加在阴性对照样板（A）、空白对照样板（B）和抗菌涂料样板（C）上.
用灭菌镊子夹起灭菌覆盖膜分别覆盖在样（A）、样（B）和样（C）上，一定要铺平且无气泡，使菌均匀接触样品，置于灭菌平ⅢL中，在（37士1）C、相对湿度RH>90%条件下培养24h.每个样品做3个平行试验.
取出培养24h的样品，分别加入20mL洗液，反复洗样（A）、样（B）、样（C）及覆盖膜（最好用镊子夹起薄膜冲洗），充分摇匀后，取洗液接种于营养琼脂培养基（NA）中，在（37土1）C下培养（24～48）h后活 菌计数，按GB/T4789.2的方法测定洗液中的活菌数.
7检验结果计算
数值分别为A、B、C，保证试验结果要满足以下要求，否则试验无效： 将以上测定的活菌数结果乘以1000为样品A、样品B、样品C培养24h后的实际回收活菌数值，
样品A的实际回收活菌数值A应均不小于1.0X10cfu/片，且样品B的实际回收活菌数值B应均不小于1.0×10cfu/片；
同一空白对照样品B的3个平行活菌数值要符合（最高对数值一最低对数值）/平均活菌数值对数值小于或等于0.3.
抗细菌率计算公式为：
式中：
R抗细菌率，以（%）表示，数值取四位有效数字，按照GB/T1250中规定进行；B空白对照样板24h后平均回收菌数（cfu/片）； C抗菌涂料样板24h后平均回收菌数（cfu/片）.
