中华人民共和国国家标准
GB/T22147-2008
饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑 特罗的测定液相色谱质谱联用法
Determination of salbutamol ractopamine and clenbuterol in feeds-
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准由中华人民共和国农业部提出.本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口. 本标准负责起草单位：中国农业大学、农业部饲料效价与安全监督检验测试中心（北京）.本标准主要起草人：张丽英、常碧影、贺平丽、董涛、杨文军、王宗义.
饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑 特罗的测定液相色谱质谱联用法
1范围
本标准规定了同步测定饲料中B-激动剂沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的液相色谱质谱联用法（LC-MS）法.
测定.本标准中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的检测限均为0.01mg/kg，定量限均为 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料和漆加剂预混合饲料中沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗的0 05 mg/kg-
2规范性引用文件
的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.凡是注日期的引用文件，其随后是否可使用这些文件的最新版本.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-1992 neqISO3696：1987)
GB/T14699.1饲料采样
3原理
试样经磷酸甲醇溶液提取，用固相萃取柱净化后，经反相C柱梯度洗脱分离，采用质谱检测器以三种物质的质量色谱峰保留时间和特征离子定性、确证，并用外标法定量.
4试剂和溶液
除特殊注明外，本标准所用试剂均为分析纯.水符合GB/T6682二级用水规定.
4.7流动相
A液：甲酸铵3.65g溶于500mL去离子水中，用甲酸调pH至3.80.B液：乙晴，色谱纯.
4.8沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准溶液
4.8.1标准贮备液：称取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗（标准品含量均>98%）各50mg分别于50mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度.于冰箱中4C保存，保存期一个月.
4.8.2标准工作中间液：移取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准贮备液（4.8.1）各1mL于100mL容量瓶中.用冰乙酸溶液（4.4）定容，
GB/T 22147-2008
4.8.3标准工作液：移取沙丁胺醇、莱克多巴胺和盐酸克仑特罗标准工作中间液（4.8.2）各0.5.1.5，10mL于100mL容量瓶中.用冰乙酸溶液（4.4）定容.
5仪器和设备
5.1分析天平：感量0.0001g.5.2聚丙烯离心管：50mL.5.3恒温水浴：可保持水温至55C和75C.5.4涡旋混合器.5.5酸度计：准确至0.001. 5.6离心机.5.7混合型阳离子交换SPE小柱.5.8固相萃取（SPE）减压净化系统.5.9液相色谱/质谱联用仪.
6试样制备
按照GB/T14699.1规定方法采样，采取样品量至少500g，以四分法缩减至200g，粉碎过40目筛，充分混匀，装瓶，备用.
7测定
7.1试样前处理
7.1.1试样提取
准确称取适量试样（配合饲料5g，浓缩饲料2g，添加剂预混合饲料1g，准确至0.0001g）于50mL离心管，用磷酸甲醇提取液（4.3）40mL，振摇提取30min，然后于离心机上以3000r/min离心10min.上清液倒人100mL容量瓶，残渣再用上述提取液（4.3）40mL、20mL，重复提取2次，每次振 摇5min~10min，于离心机上以3 000r/min离心10min后，合并上清液于100mL容量瓶中.最后用提取液（4.3）定容，混匀，过滤.
7.1.2净化
7.1.2.1配合饲料和浓缩饲料：吸取一定体积试样提取液滤液（配合饲料1mL.浓缩饲料0.5mL）于5mL试管中，置55C水浴中以氮气吹至近干.同时将固相萃取柱（5.7）固定于SPE减压净化系统（5.8）上，依次用1mL甲醇和1mL水活化、平衡.向试管中加人冰乙酸溶液（4.4)1mL，涡旋振荡，然 后全部加到小柱上.控制过柱速度不超过的1mL/min，分别用1mL淋洗液（4.6.1）和1mL甲醇淋洗一次，最后用1mL洗脱液（4.6.2）洗脱，洗脱速度不超过1mL/min.洗脱液于55C水浴中，用氮气吹干，准确加人1.00mL冰乙酸溶液（4.4）充分溶解混匀，并转移到上机样品瓶中，盖好，备用.
7.1.2.2添加剂预混合饲料：取提取液0.2mL.加硫化钠溶液（4.5）0.1mL，涡旋振荡，然后加人冰乙酸（4.4）4mL，涡旋振荡，于离心机上以3 000r/min离心10min，再取1mL上清液按照7.1.2.1步骤 过固相萃取柱（5.7）净化.
7.2测定
7.2.1色谱条件
色谱柱：C柱，内径2.1mm.柱长150mm.填充物粒度3μm.流动相：流动相A：甲酸铵缓冲溶液（4.7），流动相B：乙晴（4.1）. 柱温：室温.梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱程序
时间/min 流动相A/% 流动相 B/%0 98 25 70 3015 50 50
每次进样间隔用流动相AB=982.平衡10min流速：0.20 mL/min.进样体积：20pl.
7.2.2质谱条件
采用电喷雾正离子（ESI十）模式做选择离子检测，选择离子为： 沙丁胺醇：m/z240m/z222，m/z166;莱克多巴胺：m/z302，m/z284，m/z164;盐酸克仑特罗：m/z277，m/z259，m/z203源温度：120C.取样锥孔电压：25V.萃取锥孔电压：5V.脱溶剂氮气温度：300C.脱溶剂氮气流速：300L/h.
7.2.3定性定量方法
7.2.3.1定性
通过样品总离子流色谱图上沙丁胺醇（m/z240，m/z222，m/z166）、莱克多巴胺（m/z302，m/z284，m/z164）和盐酸克仑特罗（m/z277，m/z259，m/z203）的保留时间和各色谱峰对应的特征离子，与标准品相应的保留时间和各色谱峰对应的特征离子进行对照定性.样品与标准品保留时间的相对偏差不大于0.5%.每种药物的3个特征离子基峰百分数与标准品允许差分别为：当基峰百分数>50%时，允许%0*%0~%0%%0~%0%0基峰百分数≤10%时，允许差土50%.
7.2.3.2定量
采用M十1的准分子离子的色谱峰面积做单点校正定量.
8结果的计算与表述
试样中药物含量（X）以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，按式（1）计算：
式中：
A待测试样测得的特征离子色谱峰面积；A 标准溶液药物的特征离子色谱峰面积：-试样质量.单位为克（g）：n--稀释倍数；
