中华人民共和国国家标准
GB/T33122-2016
Detection and identification of Cepaea hortensis (Muller 1774)
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中国湿地博物馆、浙江自然博物馆.本标准主要起草人：周卫川、王沛、李敏、杨海芳、沈建国、于文涛、钱周兴、虞资、林阳武.
花园葱蜗牛检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了花网葱蜗牛Cepaea hortensis（Muller，1774）的检疫鉴定方法.本标准适用于花园葱蜗牛的检疫鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的一凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
SN/T3067软体动物常规检疫规范
3术语和定义
SN/T3067界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
注：维性生殖器主要包括输精管、阴蒸、阴茎本体、阴茎牵引肌、鞭状体等部分雌性生殖器主要包括矢囊、副矢囊、恋矢、黏液腺、受精囊、受精囊楠、盲管等部分.
蜗牛雄性生殖系统中的附器，由阴茎本体末端分支形成.
盲管diverticulum 由受精囊柄分支形成的管状结构.注：盲管为大蜗牛科Helicidae的基本特征.
3.4矢囊dart sack蜗牛雌性生殖系统中一个藏有1枚或多枚骨针的肌肉质的囊状结构.
3.5 恋矢Love dart矢囊中钙质或壳质的骨针，为蜗牛交配时刺激器官.注：恋矢的质地和形状常用于分类.
3.6
贝壳开口部位，为蜗牛头和腹足的出口.注：壳口的边缘为口唇，按其在壳口中的位置不同可分方内屑、外屏、轴腾、基屏、上屑和下屏.
4基本信息
学名 ：Cepaea hortensis (Muller 1774).
异名：Helixr horfensis Muiller 1774.
英文名: White-lipped banded snail White-lipped grove snail White-lipped garden snail.
分类地位：软体动物门Mollusca，腹足網Gastropoda，柄眼目Stylommatophora，大蜗牛科Helicidae，葱蜗牛属Cepaea Held，1837.花园葱蜗牛的近似种有森林葱蜗牛C.nemoralis （Linnaeus， 1758）、维也纳葱蜗牛C.vindoboneesis（Pfeiffer，1828）.
5方法原理
主，凡接触过地面的物品都可能传插.传播方式和传播途径是确定现场检疫方式的依据.贝壳形态、软 花园葱蜗牛昼伏夜出，常隐藏在人们难以发现的地方，易于传播.其传播特点是不需要特定的寄体解副和分子特征是实验室鉴定的主要依据.
6器具与试剂
6.1器具
体视显微镜、放大镜、手电筒、塑料自封袋、广口标本瓶、4mm孔径土壤筛、小铁铲、游标卡尺、塘瓷盘、培养Ⅲ、解剖针（直径0.15mm）镀子、剪刀、小剪刀、显微锻子、显微剪刀、解剖腊盘、标签、移液枪、微型离心机、PCR仪、1.5mL离心管、0.2mLPCR反应管、恒温金属浴.
6.2试剂
除另有规定外，试剂均为分析纯.
75%乙醇、无水乙醇、硫酸镁、动物基因组DNA提取试剂盒、PCR反应液、ddHO.
7现场检测
对来自疫区（参见附录A）的运输工具和货物实施重点查验.仔细检查运输工具、木质包装物、未经加工的植物性材料、苗木、花卉、盆景、废塑料等是否有蜗牛附着其上，花园葱蜗牛昼伏夜出，尤其要注意阴暗蔽光处的检查，用手电筒仔细寻找蜗牛的行迹.蜗牛爬行过后，会留下银灰色的丝带状黏液痕迹， 这是判定是否有蜗牛污染的重要依据.发现蜗牛，随时装入塑料自封袋或标本瓶，带回实验室做进一步的检验鉴定.发现盆景等携带土壤或其他细碎衬垫材料时，需过筛检查是否有卵或幼螺.
8实验室鉴定
8.1测量观察和软体解剖
和螺的形态特征. 用游标卡尺测量蜗牛贝壳的壳高和壳宽、卵粒长和宽.用肉眼或故大镜或体视显微镜仔细观察卵
将闷杀（见10.1)处理后的标本，参照SN/T3067解剖软体，分离出生殖系统.
8.2葱蜗牛属CepaeaHeld，1837鉴定特征
层，最后一个螺层向下倾斜.壳口倾斜，口缘宽大且内增厚，下缘直，额片粗壮，具有4条～6条粗助， 贝壳无脐孔，圆球形或稍压扁，一般具有5条黑福色的色带，但也有完全无色带的个体.有5个螺齿舌的中央齿和侧齿无齿尖.恋矢有时具有4条裂脊，黏液腺具有一显著长的分支，受精囊柄很长，分支形成盲管，阴茎具有长的鞭状体，
8.3花园葱蜗牛Cepaeahortensis（Miller.1774）鉴定特征
8.3.1卵
卵圆形，白色，短径2mm，长径2.5mm，
8.3.2贝壳
8.3.2.1成螺
而有褐色，外唇向外延伸反折，内唇贴覆于体螺层上，形成一薄的白色脏部，贝壳色彩明亮，有光泽， 其上有微弱而不规则的生长崎和螺旋状的色带0条～5条，故也称白唇彩带蜗牛.贝壳在颜色和色带数量方面变异很大，极少数口唇是褐色的个体，在形态上很像森林葱蜗牛Cepaea nemoralis（Linnaeus，1758），但本种贝壳更细薄一些，螺层更网滑一些，尺度更小一些.壳高10mm~15mm，壳宽14mm~20mm.参见附录B中图B.1:AB.C
8.3.2.2幼螺
幼螺贝壳在外部形态上与成螺无多大差异，只是个体小，壳质薄，口缘外唇不向外延伸扩展.
8.3.3螺体
行时其软体伸展长度可达3.5cm~4.2cm，参见图B.1：D. 腹足肌肉发达，通常呈灰绿色，头部棕色，从触角基部中央到颈部之间有一条浅色的线条.蜗牛爬
8.3.4生殖系统
长度，受精囊柄长，略粗.矢囊大，椭圆形，无副矢囊.黏液腺两枝，分别长在阴道两侧，每枝二分叉，分 阴茎长，阴茎本体与阴茎差不多等长，阴茎本体略带紫色.鞭状体细长.阴茎牵引肌薄而宽，中等叉后每枝又分2枝～3枝，即一枝黏液腺有4个～6个分支，而森林葱蜗牛最多只有3个分支；黏液腺管状，租实且长，光滑.阴道呈明显的紫色，参见图B.2.
8.3.5C01基因序列鉴定
按附录C方法提取DNA、PCR扩增和双向测序，将所测序列与已知花园葱蜗牛的COI基因序列（Genbank登录号为KF596879.2）进行比对，相似度一般应≥96%.参见附录C.
9结果评定
以贝壳形态为基本鉴定依据，螺体和外生殖器解剖形态为辅助鉴定特征，并注意与近似种鉴别（参见附录D），对于口唇为白色的个体，符合8.3.2或同时符合8.3.2、8.3.3、8.3.4形态特征的蜗牛鉴定为花
