中华人民共和国国家标准
GB/T33124-2016
Detection and identification of Melampsora medusae Thumen
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草.
本标准起草单位：中华人民共和国云南出人境检验检疫局、中华人民共和国厦门出人境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院.
本标准主要起草人：杜宇、岳亮亮、王宏毅、黄振、曹云华、梅华全、邓裕亮、吴品姗、周剑、段禄华.
杨树叶锈病菌检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了杨树叶锈病菌Melampsora medasaeThumen.1878的形态学鉴定方法.本标准适用于白杨Populus balsamiferaI.、黑棉杨Populas balsamifera subsp.trichocarpaspp.、美国花旗松Pseadorsaga meniziesi（Mirb.）上的杨树叶锈病菌的检疫和鉴定.
（Torr.&.Gray）Brayshaw、美洲黑杨 Popalas deltoids Mars 以及落叶松属 Larix Spp.、松属Pinuxs
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
SN/T2758美国圆柏苹果锈病菌检疫鉴定方法SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样
3术语和定义
SN/T2758界定的以及下列术语和定义适用于本文件.
由双核菌丝的顶端细胞发育成的有性休眠孢子，该类孢子产生担子.
3.2冬孢子堆telia由冬孢子聚集面成.注：冬孢子堆多数分布在叶背，有些穿过叶表面.
夏孢子urediniospore
由锈孢子产生的双核菌丝体上产生的重复性营养阶段孢子.注：夏孢子开始是在寄主体内生活，然后穿破表皮向外扩散.进人细胞后，以单细胞的形态，生出密集的刺状或泡 状的小棘：上有数个发芽孔，以芽管发芽，同样产生形成夏孢子的菌丝或冬孢子的菌丝.
3.4
夏孢子堆uredinia
注：栅铸菌属真菌的夏孢子雄没有包被但有周生侧丝. 由锈孢子萌发形成的双核菌丝体上产生的第三种孢子堆.
4杨树叶锈病菌基本信息
中文名：杨树叶锈病菌 英文名：Poplar-rust学名：Melam psora medasae Thimen，1878
异名 :Uredo medusae ( Thiumen) Arthur (1906)
无性型：Caeoma fanllianaHunter（锈孢子器状态）
锈菌科Melampsoraceae栅锈菌属Melam psora . 分类地位：真菌界 Fungi、担子菌门 Basidiomycota、冬孢菌纲Teliomycetes、锈菌目Uredinales、栅
传播途径：带菌杨树、转主寄主松属和落叶松属植物及美国花旗松Pseudotsngamenziesii（Mirb.）是远距离传播主要途径：锈孢子和夏孢子等可随风较长距离地扩散传播.
杨树叶锈病菌的生物学特性和地理分布等其他信息参见附录A.
5方法原理
主要以夏孢子的形态特征为鉴定依据，性孢子器、锈孢子器、冬孢子和担子等的形态特征为辅助鉴定依据.
6仪器设备和试剂
6.1仪器设备和工具
生物显微镜（物镜最大放大倍数100倍，备测量软件或镜台测微尺）、体视显微镜（倍数不低于50倍）、超净工作台、滴管、医用解剖刀、解剖针、高压灭菌锅、载玻片、盖玻片、三角瓶（250mL）.
6.2主要试剂
按照SN/T 2758执行.
7检测和鉴定
7.1症状检查与取样
7.1.1症状检查
7.1.1.1杨树上的症状检查
主要检查杨树叶片是否有淡黄斑，特别是叶片背面，从植株的下层叶片开始，逐步向上层叶片逐一检查，其为害症状参见A.3.
7.1.1.2针叶树上的症状检查
状参见A.3 主要检查松针上是否有褪色、腐烂，特别是检查掉落的针叶上是否有褪色和腐烂等症状，其为害症
7.1.2取样
如发现病菌为害症状，取为害样品送实验室检测.如果症状不明显或未发现症状，随机取样，方法按照SN/T 2122执行.
7.2样品制备
7.2.1生长观察
7.2.1.1如果在寄主上的症状不明显时，将取得的有疑似症状的植株放置于有隔离条件的温室中，直到
产生夏孢子止（参见A.4）.
7.2.1.2如果是转主寄主，需要将感病松针放置于美洲黑杨或杨树叶锈病菌其他寄主树苗周围，杨树叶（参见A.4）. 锈病菌的寄主树苗需要种植于有隔离条件并具备人工吹风的温室中，待锈孢子侵染寄主，产生夏孢子止
7.2.2制片
7.2.2.1切片法
采用徒手切片法将杨树叶片或针叶切成薄片（1.0pm~1.5pm），放在载玻片的水滴中，加一滴乳酚油作浮载剂，加盖玻片，备镜检，
7.2.2.2针刺法
用针直接刮取孢子堆上的孢子粉置于离心管中，加人适量的席尔氏浮载剂制成孢子悬浮液，用可调微量加样器吸取适量（以加盖玻片后悬浮液不外溢为宜）悬浮液至载玻片上，加盖玻片，制成玻片，备镜检.
7.3形态鉴定
7.3.1性孢子器
性孢子器主要是附着在叶面上包被于角质层下，散生，淡黄色，长40gm~55gm.
7.3.2锈孢子器
锈孢子器着生在叶背，裸生，淡黄色，大量孢子器堆生，直径0.5mm；锈孢子链珠状，近球形，直径17μm~22μm，孢子壁无色，厚2.5μm~3μm，表面略粗糙.
7.3.3夏孢子
夏孢子堆着生于叶表皮下，大多数突出于叶背面，少量突出叶表，金黄色至橙色，直径150μm～250μm，在一些寄主上主要分布在上层叶表，表现为淡色小斑：夏孢子卵圆形至圆形，有时近梨形，端部圆形，基部平截，内容物金黄色，壁无色；长（23μm~37zm）×（13gm~21gm），端部厚1gm~1.5μm，基部厚2μm，两侧厚3m~5.5μm；壁上被蒙，长8μm~12μm，超过腰部的一半的区域光滑， 极少数儿乎整个腰部全部光滑：小辣长1ym~1.5μm，宽0.5μm~0.7ym，棘间距1.5μm~3gm，临近光滑区域，小蔡变小，发芽孔儿乎不可见，孢子上有2～4处可萌芽.夏孢子萌发的菌丝，从夏孢子堆上四散开来，呈头状丝序，柄长70μm，宽4μm~6μm，顶端近圆形，直径14pm~17pm，或倒卵圆形，少数棍棒形，（18μm~22μm）×（12xm~16μcm），壁厚度均匀，1.5μm~3μm，少数在端部可厚达4μm杨树叶锈病菌夏孢子的形态特征见附录B.
7.3.4冬孢子
在老叶上，冬孢子堆与夏孢子堆混合，在落叶上大量发生，主要分布在叶背面，在严重感病时，也分布在叶面，开始时呈淡號珀棕色，变黑后，呈深红棕色，干枯时呈近黑色，冬孢子堆微突出在表皮层下，350μm.有些冬孢子堆穿过叶面，在叶两面上产生冬孢子，冬孢子是单细胞，近圆柱形，横切面呈圆形至不规则形，直径30pm~40μm，壁厚11μm~14μm，有时在端部壁厚2μm~2.5μm，包被于寄主表皮层下.
