中华人民共和国国家标准
GB/T 36004-2018
食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法
Food contact surfaces cleaning and disinfection efficacy test methodATPbioluminescencemethod
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中国轻工业联合会提出.本标准起草单位：上海市计量测试技术研究院、中国日用化学工业研究院、艺康（中国）投资有限公司、洛娃科技实业集团有限公司.
本标准主要起草人：刘刚、徐勤、李妍、许丽、季振栋、季靓、赵画珺、俞云表、姚晨之、赵建利.
食品接触表面清洗消毒效果试验方法 三磷酸腺苷生物发光法
1范围
本标准规定了一种基于三磷酸腺苷（Adenosinetriphosphate，ATP）生物发光原理进行食品接触表面清洗消毒效果评价的试验方法.
本标准适用于采用三磷酸腺苷生物发光法对食品接触表面清洗消毒效果进行的评价.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
3.1
食品接触表面food contact surfaces
触的表面. 食品包装材料、容器，食品加工、生产和经营中的器具、餐具、设备、地面、墙面等可能与食品直接接
3.2
清洗cleaning
除去物品上的污染，使之达到预定用途或进一步处理所需的过程.
杀灭或清除传播媒介上病原微生物，使其达到无害化的处理过程.
3.4
相对发光单位relativelight unit：RLU
化学发光分析仪的发光计量单位.
4原理
及的动物和植物体中包括食物和食物残渣中都含有ATP，而无生命的碎屑物质中不存在ATP. 三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate，ATP）是生命过程的主要能量来源，在细菌、酵母菌和霉菌以生物活性物质中的ATP含量是相对恒定的借助荧光素-荧光素酶发光反应可以对ATP进行定量，从面可以反映出生物量残留，因此可以对清洗消毒效果进行评价.
5ATP检测方法
5.1方法一：手持式ATP生物发光检测仪涂抹法
5.1.1试剂和材料
仪器配套的涂抹采样棒.
5.1.2仪器
手持式ATP检测仪.
5.1.3涂抹采样方法
从试管内取出采样棒，食指与拇指握住采样棒上端，确保采样棒可以被旋转.轻轻向下施压，并不断转动采样棒.在选定涂抹区域内，水平、上下重复涂抹该区域直至涂抹完整个表面.涂抹完成后将涂 抹采样棒放回试管中，对于平头取样器，与涂抹表面保持垂直，并采用同样方式覆盖整个表面.
5.1.4ATP的检测
采样棒约5s，充分混合试剂，将试管插人仪器中进行检测.测得结果表示为相对光单位（RLU）. 按仅器说明书进行开机和校正后，将采样棒完全按入试管中，激活ATP发光反应.快速来回振荡
5.1.5注意事项
使用手持式ATP发光检测仅涂抹法需注意以下事项：
a）涂抹过程中手不要触及采样头及涂抹表面： b）操作者要执行统一一致的涂抹方式以得到可重复的结果；d）不同制造商提供的涂抹采样棒应使用各自配套的仪器进行检测，检测结果可以参考仪器供应e）不同仅器检测数值不能混在一起比较，当使用不同厂家的仪器进行该实验，所得结果可能不 商提供的标准，同时得到供应商培训合格后方能从事检测工作；一致，
5.2方法二：台式化学发光分析仪检测法
5.2.1试剂和材料
除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的三级或以上的水.5.2.1.1ATP检测试剂盒.试剂盒包括细胞裂解液、检测缓冲液、荧光素-荧光素酶混合物、ATP标准 溶液.5.2.1.2无菌水.高压灭菌后的实验用水.灭菌条件为：压力103kPa，温度121℃～126℃下蒸汽灭菌20min，本标准中的灭菌操作均使用该条件.5.2.1.3经高压灭菌的金属镊子.
5.2.1.4滤纸片.将滤纸片剪成5cmX5cm规格，高压灭菌后使用.
5.2.2收器
普通实验室仪器和以下仪器.5.2.2.1微孔板化学发光分析仪.
5.2.2.2高压灭菌锅，5.2.2.3离心机.5.2.2.4移液器，带已灭菌的一次性枪头.5.2.2.5经高压灭菌的玻璃器Ⅲ.5.2.2.6已灭菌塑料离心管，15mL
5.2.3采样和提取
用灭菌镊子将5cm×5cm的湿润灭菌滤纸片紧贴食品接触表面，并用镊子牵引滤纸在被测样品表面轻轻来回移动1min.置于有5mL细胞裂解液的离心管中，充分振荡后，将离心管放人离心机中， 设置离心机温度为4℃，离心力为12000g，离心时间5min，离心后滤纸碎片聚集在离心管的底部，用移液器取出上层清液，用于后续测定.
5.2.4检测
取液，用微孔板化学发光分析仅检测响应（有些系统要求将荧光素-荧光素酶混合物注射到样品中），得 按照ATP检测试剂盒说明书，将荧光素-荧光素酶混合物溶解到检测缓冲液中，加人足量的细胞提到RLU值.
每份样品平行分析三次.
5.2.5注意事项
使用台式发光分析仅检测法需注意以下事项：
a）检测ATP时应使用洁净无ATP的玻璃器Ⅲ：b）荧光素酶的冻融次数不宜超过3次，反复冻融会导致其逐渐失活：c）裂解后样品中的ATP在室温不太稳定，需在4C或冰上操作.ATP在冰上可以稳定长达 6 h;d）细菌能在无菌水中生存和繁殖，这会造成ATP的干扰，因此无菌水的质量应定期检验.
6实验室清洗消毒效果评价方法
6.1仪器
6.1.1高压灭菌锅.6.1.2恒温培养箱.6.1.3离心机.6.1.4生物安全柜.
6.2试剂和材料
6.2.1大肠杆菌菌株.6.2.2LB液体培养基.配制方法：950mL实验用水中加人胰蛋白陈10g、酵母提取物5g.NaCl10g，摇动容器直至溶质溶解.用5mol/LNaOH调pH至7.0，用实验用水定容至1L在103kPa高压下蒸 汽灭菌20 min.6.2.3一次性塑料无菌培养Ⅲ，直径为9cm.6.2.4灭菌美工刀.6.2.5灭菌棉棒， 6.2.6灭菌离心管.
