SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3984-2014 犬细小病毒实时荧光PCR检疫技术规范 Quarantine protocol for canine parvovirus by real-time PCR 2014-11-19发布 2015-05-01实施 中华人民共和国 发布 ocan 国家质量监督检验检疫总局 刮涂层真伪 SN/T3984-2014 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国四川出人境检验检疫局、西南民族大学. 本标准主要起草人：陈世界、杨苗、林华、胡娟、杨晓农、张焕容、杨发龙、薛昌华、于学辉、牟静、王斌、 黄河、余华. I SN/T3984-2014 犬细小病毒实时荧光PCR检疫技术规范 1范围 本标准规定了犬细小病毒实时荧光PCR检测方法的技术要求. 本标准适用于易感动物犬细小病毒的检测. 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于术文件. GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2123出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范 3仪器和试剂 3.1主要仪器 3.1.1荧光定量PCR仪. 3.1.2高速冷冻离心机. 3.1.3旋涡混匀器. 3.1.4恒温循环水浴槽. 3.1.5低温冰箱. 3.1.6可调单头微量移液器. 3.2主要试剂 试剂为分析纯或生化试剂，用于实时荧光PCR的试剂均用无DNA酶污染的容器分装.试验 用水均为灭菌超纯水，应符合GB/T6682中的三级水要求. 3.2.1动物粪便DNA提取试剂盒. 3.2.2动物血液与组织DNA提取试剂盒. 3.2.3荧光定量PCR反应预混液. 3.2.4犬细小病毒阳性质粒，DNA序列为GGCCTGGGAACAGTCTTGACCAAGGAGAACCAACT AACCCTTCTGACGCCGCTGCAAAAGAACACGACGAAGCTTACGCTGCTTATCTTCGC. 3.2.5实时荧光PCR扩增所用的引物和探针的序列见表1. 表1引物和TaqMan探针 引物和探针 序列 长度/bp Tm值/℃ GC/% 上游引物 5'-GGCCTGGGAACAGTCTTGAC-3' 20 55.9 60.0 下游引物 5'-GCGAAGATAAGCAGCGTAAGC-3' 21 54.4 52.4 Taqman探针 5'-FAM-CCAACTAACCCTTCTGACGCCGCTG-TAMRA-3' 25 62.6 60.0 1 ...
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