ICS59.140.20 B45 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T3308-2018 动物皮张源性成分鉴定 实时荧光定性PCR法 Identification of animal-derived materials in leather- Qualitative realtime PCR method 2018-12-19发布 2019-06-01实施 中华人民共和国农业农村部发布 NY/T3308-2018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 本标准由农业农村部畜牧兽医局提出. 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC/TC274)归口. 本标准起草单位：山东省农业科学院生物技术研究中心. 本标准主要起草人：步迅、范阳阳、刘艳艳、张全芳、胡悦、谷玉霞、马德源、李燕、杨雪、谭晴晴、陈雪 燕、刘国霞、王兴军. I NY/T3308-2018 动物皮张源性成分鉴定实时荧光定性PCR法 1范围 本标准规定了利用实时荧光定性PCR法对水貂、狐狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山 羊)、貉子和家犬9种动物皮张源性成分进行检测 本标准适用于动物皮张及初加工品中水貂、狐狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山羊）、貉 子和家犬9种源性成分的定性检测 本方法检出限为1%. 2规范性引用文件 ARD POBLISHD 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的 用文代仅注日期的版本适用于本文 件.凡是不注日期的引用文体 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 活的修改单州疆 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27403实验质量控制规食品分子生物学检测 实时荧光PCR qualitative realtime PCR 在PCR反应体系中加人荧光基因，利用荧光信号积累实时监控整个PCR进程，对未知模板进行定 性或定量分析 3.2 Ct值cycle threshold CEN 每个实时荧光PC反应管内的荧光信号达到设定的值时所经历的循环数/ 4原理 4 男 根据线粒体16SDNA基因在不同物种间保守区设计通用引物，在可变区设计物种特异性探针， 采用TaqMan实时荧光PCR技术进行扩增，根据PCR扩增反应的荧光信号及循环值，判定水貂、狐 狸、兔、牛（普通牛、黄牛）、马、猪、羊（绵羊、山羊貉子和家大9种动物源性成分. 5试剂或材料 除另有规定外，仅使用分析纯试剂. 5.1水，GB/T6682 一级. 5.21mol/LTris-HCl(pH8.0)溶液：称取12.1 g Tris置于100mL烧杯中，加入80mL水，用浓HCl 调节pH至8.0，加水定容至100mL 103.4kPa(121℃)灭菌20min 室温保存待用. 5.31mol/LTris-HCl(pH6.4)溶液：称取12.1 g Tris置于100mL烧杯中，加入80mL水，用浓 HCl调节pH至6.4，加水定容至100mL 103.4kPa蒸汽压(121℃)灭菌20min 室温保存待用. 5.40.5mol/L EDTA(pH8.0)溶液：称取18.61gNa2EDTA2H2O置于100mL烧杯中，加入 80mL水，用10%的NaOH溶液，调节pH至8.0，加水定容至100mL 高压灭菌后室温保存待用. 1 ...
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