ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2252-2012 槟榔黄化病病原物分子检测技术规范 Molecular detection for pathogen of arecanut yellow leaf disease 2012-12-07发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2252-2012 前 言 .本标准按照GB/T1.1给出的规则起草. 本标准由农业部农垦局提出. 本标准由农业部热带作物及制品标准化委员会归口. 本标准起草单位：中国热带农业科学院环境与植物保护研究所. 本标准主要起草人：罗大全、车海彦、温衍生、徐雪莲. I NY/T2252—2012 槟榔黄化病病原物分子检测技术规范 1范围 本标准规定了槟榔黄化病病原物的检测方法. 本标准适用于槟榔植株中黄化病病原物的定性检测. 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. 2.1 植原体phytoplasma 寄生于植物韧皮部筛管和介体昆虫体内的，具有三层单位膜结构的无细胞壁的原核生物，一般引起 植物叶片黄化和发育畸形等症状. 2.2 槟榔黄化病arecanut yellow leaf disease 由植原体引起的一种槟榔病害，该病害病原菌的分类地位、寄主范围、危害症状及地理分布见 D.1~D.4. 2.3 聚合酶链式反应polymerase chain reaction PCR 模板基因序列先经高温变性成为单链，在DNA聚合酶作用和适宜的反应条件下，根据模板序列设 计的两条引物分别与模板DNA两条链上相应的一段互补序列发生退火而互相结合，接着在DNA聚合 酶的作用下以四种脱氧核糖核酸(dNTP)为底物，使引物得以延伸，然后不断重复变性、退火和延伸这 一循环，使欲扩增的基因片段以几何倍数扩增. 2.4 巢式聚合酶链式反应nested PCR 巢式PCR 利用两套PCR引物对（巢式引物）进行两轮PCR扩增反应，首先用一对外引物进行第一轮PCR扩 增，然后再使用第一对引物扩增的DNA序列内部的一对内引物再次扩增. 3原理 利用植原体通用引物R16mF2/R16mR1和R16F2n/R16R2 对待检样品进行巢式PCR扩增，依据 扩增的片段序列的限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism RFLP)图谱是否 与槟榔黄化植原体核糖体DNA(16SDNA)序列的RFLP图谱一致，判断样品中是否存在槟榔黄化植 原体. 4巢式PCR检测所用仪器，试剂和方法 见附录A. 5巢式PCR检测 5.1田间取样 根据附录D.3和D.4的描述，初步确定槟榔植株是否为槟榔黄化病疑似病株.田间取疑似槟榔植 1 ...
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