GB 31610.4-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中华支睾吸虫的检验.pdf

GB 中华人民共和国国家标准 GB31610.4—2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中 华支睾吸虫的检验 2023-09-06发布 2024-03-06实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 发布 国家市场监督管理总局 GB31610.4-2023 食品安全国家标准 动物性水产品及其制品中 华支睾吸虫的检验 1范围 本标准规定了动物性水产品及其制品中华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)囊呦的形态学和PCR检 验方法. 本标准适用于动物性水产品及其制品中华支睾吸虫囊蚴的检验. 2原理 动物性水产品及其制品中的华支睾吸虫囊呦主要寄生于淡水鱼和淡水虾的肌肉组织.用压片法观 察囊呦或使用胃蛋白酶消化动物性水产品及其制品的肌肉组织获得囊蚴.根据囊蚴的形态特征，初步 判断囊蚴的种类.通过护增华支睾吸虫核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)基因片段并测序，进行 华支睾吸虫囊呦的鉴定. 3仪器和设备 3.1生物显微镜：100×~400×. 3.2体视显微镜：7.5×~150×. 3.3PCR扩增仪. 3.4凝胶成像系统. 3.5电泳仪. 3.6恒温培养箱：37℃±1℃. 3.7高速离心机：转速≥12000r/min. 3.8网筛：孔径0.25mm(60目). 3.9锥形量杯：1000mL. 3.10微量移液器：0.2gL~2.5gL、1gL~10uL、10gL~100gL、100L~1000L. 4试剂和材料 4.1试剂 4.1.1盐酸：36%~38%HC1溶液. 4.1.2生理盐水：0.85%NaCl溶液. 4.1.31mol/L.Tris-HCl溶液(pH8.0). 4.1.40.5mol/L EDTA溶液(pH8.0). 4.1.510%SDS溶液. 4.1.65mol/L NaCI溶液. GB31610.4-2023 4.1.73000U/mg胃蛋白酶. 4.1.820mg/mL蛋白酶K. 4.1.9苯酚/三氯甲烷/异戊醇(25：24：1). 4.1.105U/L耐热DNA聚合酶. 4.1.1110XPCR缓冲液. 4.1.12 25 mmol/L MgCl2. 4.1.13 dNTPs:dATP、dTTP、dCTP、dGTP 每种浓度为2.5mmol/L. 4.1.14琼脂糖：电泳级. 4.1.1550XTAE缓冲液：使用前用去离子水稀释成1XTAE缓冲液. 4.1.161×TE溶液(pH8.0). 4.1.1710mg/mL溴化乙锭(EB)或其他核酸染料. 4.1.186×上样缓冲液. 4.1.19100bp~2000 bp DNA分子量标准. 4.1.20PCR引物：浓度为20umol/L. 正向引物CS1:5'-CGAGGGTCGGCTTATAAAC-3' 反向引物CS2:5'-GGAAAGTTAAGCACCGACO-3' 扩增华支睾吸虫ITS2基因片段长度为315bp. 4.2试剂配制 4.2.1生理盐水：称取8.5 g NaCl溶解于900mL去离子水，再加去离子水至1000mL 4.2.21mol/L Tris-HCl溶液：称取121.1 g Tris(三羟甲基氨基甲烷)溶解于800mL去离子水，用盐 酸调节pH至8.0，加去离子水至1000mL 4.2.30.5mol/L EDTA溶液：称取186.1gNa2EDTA2H2O(二水合乙二胺四乙酸二钠)溶解于 800mL.去离子水，搅拌溶解，用NaOH调节pH至8.0，加去离子水至1000mL. 4.2.45mol/L NaCI溶液：称取292.5 g Na...