GB/T18204.8-2000 前言 为贯彻执行《公共场所卫生管理条例》和GB9663~9673一1996、GB16153一1996《公共场所卫生标 准》，加强对公共场所卫生监督管理，特制定本标准.本标准中的方法是与GB9663~9673一1996， GB16153一1996相配套的监测检验方法. 本标准为首次发布. 本标准由中华人民共和国卫生部提出. 本标准起草单位：北京市卫生防疫站、江苏省卫生防疫站、中国预防医学科学院环境卫生监测所. 本标准主要起草人：高晖、封幼玲、周淑玉、符晓梅、韩秀媛. 27 中华人民共和国国家标准 公共场所拖鞋微生物检验方法 霉菌和酵母菌测定 GB/T18204.8—2000 Methods of microbiological examination for slippers in public places -Determination of molds and yeasts count 1范围 本标准规定了公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的检验方法. 本标准适用于公共场所公用拖鞋霉菌和酵母菌的测定. 2定义 本标准采用下列定义. 霉菌和酵母菌测定determination of molds and yeasts count 指在一定条件培养后，50cm2面积检样中所含有的霉菌和酵母菌落数.霉菌和酵母菌主要作为判 定被检样品被霉菌和酵母菌污染程度的标志，以便对被检样进行卫生学评价时提供依据. 3仪器和材料 3.1恒温箱：25~28℃. 3.2显微镜. 3.3高压蒸汽灭菌器. 3.4酒精灯. 3.5接种针. 3.6平皿：直径9cm. 3.7试管架. 3.8试管. 3.9玻璃珠. 3.10无菌棉拭子. 4培养基和试剂 4.1生理盐水 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000mL 溶解后，分装到加玻璃珠的试管内，10mL和9mL 121℃20min高压灭菌. 4.2霉菌培养基 成分：蛋白陈 5g 酵母浸出粉 2g 国家质量技术监督局2000-09-30批准 2001-01-01实施 28 GB/T18204.8-2000 葡萄糖 20g 磷酸氢二钾 1g 硫酸镁(MgSO47H2O) 0.5g 琼脂 20g 氯霉素 0.1g 蒸馏水 1000mL 制法：除葡萄糖外，取上述成分加入水内，微温溶解，调H为6.8，煮沸，加葡萄糖溶解后，过滤调 pH 使灭菌后pH为6.4士0.2 115℃20min高压灭菌. 4.3虎红（孟加拉红）培养基 成分：蛋白陈 5g 葡萄糖 10g 磷酸二氢钾 1g 硫酸镁(MgSO7H2O) 0.5g 琼脂 20g 1:3000虎红水溶液 100mL 氯霉素 0.1g 蒸馏水 1000mL 制法：将上述各成分（除虎红外）加入蒸馏水中溶解后，再加入虎红溶液，分装后，高压灭菌121℃ 20 min. 4.4马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA) 成分：马铃薯（去皮切块） 300g 葡萄糖 20g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 制法：将马铃薯去皮切块，加1000mL蒸馏水，煮沸10~20min.用纱布过滤，补加蒸馏水至 1000mL.加入葡萄糖和琼脂，加热溶化，分装，121℃高压灭菌20min. 5操作步骤 5.1将无菌棉拭子蘸取无菌生理盐水，在每只拖鞋鞋面与脚趾接触处5cm×5cm面积上，有顺序地均 匀涂抹3次（一双拖鞋为一份样品）后，用灭菌剪刀将棉拭子手执部分剪断，将棉拭子放入10L装有 玻璃珠的无菌盐水管中. 5.2将盛有棉拭子的盐水管在手心用力振荡100次，再用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50 次...
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