NY
中华人民共和国农业行业标准
NY/T 4845-2025
饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的测定
Determination ofselenomethionine in feed additivefeastselenium
中华人民共和国农业农村部 发布
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本文件起草单位：安琪酵母股份有限公司、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所[国家饲料质量检验检测中心（北京）、中国农业科学院北京畜牧兽医研究所.
本文件主要起草人：薛刚、肖志明、覃先武、张军民、汤超华、罗必英、陈敬帮、郑洪故、樊霞.
饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的测定
1范围
本文件描述了饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的液相色谱-原子荧光光谱联用（LC-HG-AFS）和液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用（1C-1CP/MS>的测定方法.
本文件适用于饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的测定.
本文件液相色谱-原子荧光光谱联用法硒代蛋氨酸的检出限为10mg/kg，定量限为30mg/kg：液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用法硒代蛋氨酸的检出限为1mg/kg定量限为3mg/kg.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4液相色谱-原子荧光光谱联用法（LC-HG-AFS）
4.1原理
试样以蛋白酶酶解采用液相色谱-原子荧光光谱联用仪检测，外标法定量.
4.2试剂或材料
除另有规定外，所用试剂均为分析纯.4.2.2甲醇：色谱纯. 4.2.1水：GB/T6682.一级.4.2.3乙酸.4.2.4盐酸：优级纯.4.2.5四甲基氢氧化铵：25%.4.2.6三羟甲基氨基甲烷.4.2.7乙酸铵：色谱纯.4. 2.8蛋白酶（Protease XIV 型，CAS;9036-06-0):酶活力≥3.5 U/mg（在 pH 7.5和 37C条件下，1mg酶每分钟水解酪蛋白产生不少于3.5μmol陷氨酸）. 4.2.9代蛋氨酸（CAS:3211-76-5）；纯度≥98%.4.2.10盐酸溶液（6mol/L)；量取100mL盐酸（4.2.4）缓慢加入100mL水中，混匀，冷却后使用.4.2.11三羟甲基氨基甲烷-盐酸（Tris-HCI>缓冲溶液（0.1mol/L.pH7.5）：准确称取12.11g三羟甲基氨基甲烷（4.2.6），用900mL水溶解，用盐酸溶液（4.2.10）调节pH至7.5，定容至1L.4.2.12流动相：称取1.156g乙酸铵（4.2.7）溶于900mL水中，加人0.15mL四甲基氢氧化铵（4.2.5），用乙酸（4.2.3）调节pH至5.5，加人50mL甲醇（4.2.2），加水定容至1L.4.2.13硒代蛋氨酸标准储备溶液（300pg/mL）：称取15.00mg硒代蛋氨酸标准品（4.2.9），精确至
0.01mg，于50mL容量瓶中.用水溶解并定容.此溶液置于0C～4C冰箱保存，有效期为1个月.4.2.14硒代蛋氨酸中间溶液（3μg/mL）：吸取1.0mL代蛋氨酸标准储备液（4.2.13）于100mL容量瓶内，用水定容，此溶液临用现配.4.2.15硒代蛋氨酸标准工作溶液：吸取晒代蛋氨酸中间溶液（4.2.14）0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、 6.0mL、8.0mL、10.0mL于50mL容量瓶内，用水定容，得到浓度分别为0μg/L、60μg/L、120μg/L、240 μg/L、360μg/L480 μg/L、600μg/L 的标准工作溶液.
4.3仪器设备
4.3.1液相色谐-原子荧光光谱联用仅：配备晒空心阴极灯.4.3.2电子天平：感量为0.1 mg和0.01 mg.4.3.4离心机：转速不低于10000r/min. 4.3.3水浴摇床：振荡速率为150r/min，37C士1℃.4.3.5pH计.4.3.6滤膜：水系，孔径为0.45μm
4.4样品
按GB/T20195制备试样，至少200g，粉碎使其全部过0.42mm孔径的分析筛，充分混匀，装人密闭容器中，备用.
4.5试验步骤
4.5.1提取
平行做两份试验.称取50mg（精确至0.1mg）试样于50mL塑料离心管内，加人5mL缓冲液（4.2.11)，在90℃水浴中加热10min，迅速冷却至室温，加入10mg蛋白酶（4.2.8），置于水浴摇床中，在37℃150r/min酶解3h_取出，10000r/min离心10min，上清液转移至另一离心管中，4C暂存.
后置于水浴摇床中，在37℃150r/min酶解3h.取出，10000r/min离心10min，上清液合并. 在离心后留有残渣的水解管中加人10mg蛋白酶（4.2.8），再加人5mL缓冲液（4.2.11），涡旋混匀
用水定容至25mL，混匀、稀释、过膜后上机分析.
4.5.2测定
4.5.2.1液相色谱参考条件色谱柱：C柱，长度250mm，内径4.6mm，粒径5.0pm，或性能相当者.流速：1.0mL/min. 柱温：35℃进样量：100pL.
4.5.2.2氢化物发生器参考条件
载液：10%HC1，流速6.0mL/min.载气、屏蔽气均为氯气，载气流速300mL/min，屏蔽气流速600mL/min. 还原剂：2%NaBH溶液，含0 5%NaOH，流速4.0mL/min
4.5.2.3原子荧光光谱参考条件
负高压：270V.炉温：200℃辅灯电流：120mA. 主灯电流：120mA.原子化器高度：9.0mm.
4.5.2.4标准工作溶液和试样溶液测定
分别取标准工作溶液（4.2.15）和试样溶液（4.5.1）上机（4.3.1）测定.在上述色诺条件下，硒代蛋氨酸标准溶液色谱图见附录A中的图A.1.
