中华人民共和国国家标准
GB/T 34222-2017
Determinationof the activity ofribonuclease
中国国家标准化管理委员会 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草
本标准由中国标准化研究院提出并归口.
本标准起草单位：中国标准化研究院、厦门市格灵生物技术有限公司、福建赛福食品检测研究限公司、浙江工商大学、河北农业大学、合肥工业大学、河北省出入境检验检疫局、泉州市标准化研究所、 北京市食品科学研究院、河北食品检验研究院、东营市标准化信息所、河南大学.
本标准主要起草人：马爱进、陈智勇、黄秀娟、王彦波、孙纪录、郑磊、刘道亮、林清山、孙勇、云振宇、博玲琳、吴琦、赵琳、周魏、刘鹏、康文艺、宗学花.
核糖核酸酶活力检测方法
1范围
本标准规定了核糖核酸酶活力检测原理、仪器设备及器具、主要试剂、分析步骤和结果分析. 本标准适用于生化试剂核糖核酸酶活力检测.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
核糖核酸酶ribonuclease：RNase
水解核糖核酸（RNA）中磷酸二酯键，生成寡核苷酸或单核苷酸的核酸酵.
3.2
核糖核酸酶活力单位ribonuclease aetivity unit
液在260nm处吸光度增加0.001所需要的酶量.
注：一个酶活力单位以U表示.
4原理
核糖核酸酶催化核糖核酸分解，降解产物在260nm波长下具有特征吸收峰，通过外标法计算核糖核酸酶的酶活力，
5仪器设备及器具
5.1恒温水浴槽：精度为0.1℃5.2紫外-可见分光光度计：精度为0.001.5.3pH计：精度为0.01.5.41cm石英比色Ⅲ. 5.5电子天平：精度为0.0001g、0.01g或0.1g.
6试剂
本方法所用试剂均为分析纯，除特殊说明外，实验用水均为GB/T6882规定的二级水.
GB/T 34222-2017
6.10.1mol/L乙酸钠/乙酸（CH;COONa/CHCOOH.NaAc/HAc）缓冲液pH5.0
称取8.2gNaAc，精确至0.01g，溶于水中，缓慢加人HAc调pH至5.0，混匀后定容至1000mL.
6.2酵母核糖核酸
来源于圆酵母，含量≥98%.
7分析步骤
7.1环境要求
试验操作应在洁净的无外源RNA酵环境中进行.
7.2试验液的制备
7.2.1酵母RNA溶液
称取酵母RNA0.015g，精确至0.0001g，溶于水中，使其溶液浓度为0.15mg/mL.
7.2.2固体样品待测酶液制备
根据标称，称取固体待测样品适量溶于水中.调节核糖核酸酶活力在10U/mg~200U/mg.
7.2.3液体样品待测酶液制备
根据标称，用水调节待测液体样品的核糖核酸酶活力在10U/mL~200U/mL.
7.3酶促反应
液1.5mL、水0.5mL与NaAc/HAc缓冲液1.0mL:检测管中依次加入酵母核糖核酸（RNA）溶液 同一样本取4只离心管，设置空白对照管1只，检测管3只，其中空白管中依次加人酵母RNA溶1.5 mL、待测酶液0.5mL以及NaAc/HAc缓冲液1.0mL.每个待测酵液设定三个重复即3个检测管，50C士1℃C恒温水浴反应时间为15min，
7.4分光光度分析
空白对照管标记为0号管，检测管分别标记为1号管～3号管，加样方法如表1所示，反应后在260nm处测对照管和检测管溶液的吸光度，并记录结果.
表1待测样液加样方法
试剂 基台0 1号管 2号管 基台醇母核糖核酸溶液/mL 1.5 1.5 1 5 1.5水/mL 0 5 0 0 0 0 0 0NaAc/HAc 缓冲液/ml 1. 0 0 0 1 0 1 0 0 5 1.0 0.5待测酶液/mL 0 5
8结果分析
8.1酶活力计算
按照式（1)计算：
式中：
C 核糖核酸酶活力（U/mL或U/mg）；1000吸光度原值与活力规定中规定吸光度0.001的换算系数； A ** 检测管与空白对照管在260nm处测定得到的吸收值差；15 反应时间与活力单位定义中的换算系数.
以平行样的平均值为最终的酶活力测定值，计算结果保留整数位.
8.2定量限
本方法的定量限为10U/mL或10U/mg.
8.3重复性
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%.
