中华人民共和国国家标准
GB 5009.312-2026
食品安全国家标准
食品中多种真菌毒素的测定
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中多种真菌毒素的测定
1范围
本标准规定了食品中多种真菌毒素的测定方法.
第一法同位素内标-液相色谱-质谱/质谱法适用于谷物及其制品、婴幼儿谷类辅助食品中黄曲霉毒素B（AFB）、黄曲霉毒素B（AFB）、黄曲霉毒素G（AFG）、黄曲霉毒素G（AFG）、脱氧雪腐刀菌 烯醇（DON）、雪腐镰刀菌烯醇（NIV）、3-乙酰基脱氧雪腐刀菌烯醇（3-AcDON）、15-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇（15-AcDON）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷（DON-3-G）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、赭曲霉毒素A（OTA）、伏马菌素B（FB）、伏马菌素B（FB）、伏马菌素B（FB）、T-2毒素（T-2）、HT-2毒素（HT-2）、杂色曲霉素（ST）、细交链孢菌酮酸（TeA）、交链孢酚（AOH）、腾毒素（TEN）、交链孢酚单甲醚（AME）的测定.
第二法免疫亲和柱净化-液相色谱-质谱/质谱法适用于谷物及其制品、婴幼儿谷类辅助食品、茶叶、坚果及籽类、香辛料类食品中黄曲霉毒素B（AFB）、黄曲霉毒素B（AFB）、黄曲霉毒素G（AFG）、黄曲霉毒素G（AFG：）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）、玉米赤霉烯酮（ZEN）、曲霉毒素A（OTA）、伏马菌素B （FB）、伏马菌素B（FB）、伏马菌素B（FB ）、T-2毒素（T-2）、HT-2毒素（HT-2）的测定.
第一法同位素内标-液相色谱-质谱/质谱法
2原理
试样依次以酸性乙晴溶液和酸性甲醇溶液提取，稀释后添加同位素内标，液相色谱-质谱/质谱仪检测，同位素内标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙晴（CHCN)，色谱纯.3.1.2甲醇（CHOH），色谱纯.3.1.3碳酸氢铵（NHHCO），色谱纯.3.1.5甲醇（CHOH）. 3.1.4乙晴（CHCN）.3.1.6甲酸（HCOOH）.
3.2试剂配制
3.2.1乙晴-水-甲酸（70291）：量取290mL水、10mL甲酸加人到700mL乙晴中，混匀.
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3.2.2甲醇-水-甲酸（1089十1）：量取100mL甲醇、10mL甲酸加人到890mL水中，混匀. 3.2.3乙晴-水（28）：量取200mL乙加人到800mL水中，混匀.3.2.4乙晴-水（11）：量取500mL乙加人到500mL水中，混匀.3.2.5碳酸氢铵溶液（2mmol/L）：称取0.158g碳酸氢铵，溶于水并稀释至1000mL，混匀.3.2.6乙晴-甲醇（11）：量取500mL色谱纯乙加人到500mL色谱纯甲醇中，混匀.
3.3标准品
21种真菌毒素标准品及同位素内标的信息见附录A.
3.4标准溶液配制
警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行.该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台和废弃物存放装置.在整个实验过程中，操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施.
3.4.1单一标准储备液
用乙晴-水溶液（11）溶解或稀释FB、FB、FB的标准品，用甲醇溶解或稀释其他18种真菌毒素的标准品，配制21种真菌毒素单一标准储备液，分别置于棕色试剂瓶中，FB、FB：、FB储备液在2C~10 μg/mL).
3.4.2混合标准储备液
3.4.2.1混合标准储备液1
分别移取一定体积的FB、FB和FB;单一标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用乙晴-水（11）定容至刻度，混匀，得混合标准储备液1，转移至棕色玻璃瓶中，2℃～6℃下避光保存，有效期6个月.混合标准储备液配制浓度1见附表B.1.
3.4.2.2混合标准储备液2
分别移取一定体积的其他18种真菌毒素单一标准储备液于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，得混合标准储备液2-转移至棕色玻璃瓶中，一18℃下避光保存，有效期6个月.混合标准储备液2配制浓度见附表B.2.
3.4.3真菌毒素同位素内标单一储备液
FBFB、FB的同位素内标储备液在2℃C～6C下避光保存，其他真菌毒素同位素内标储备液在一18℃下避光保存，有效期6个月（真菌毒素同位素内标浓度大于1μg/mL）.
3.4.4真菌毒素同位素内标混合工作液
3.4.4.1同位素内标混合工作液1
（11）定容至刻度，充分混匀得同位素内标工作液1.转移至棕色玻璃瓶中，2℃～6℃下避光保存，有 分别移取一定体积的FB、FB和FB，的同位素内标溶液于5mL棕色容量瓶中，用乙晴-水溶液效期3个月，
3.4.4.2同位素内标混合工作液2
2 分别移取一定体积的其他18种真菌毒素同位素内标溶液于另一5mL棕色容量瓶中，用甲醇定容
至刻度，充分混匀得同位素内标工作液2，转移至棕色玻璃瓶中，一18C下避光保存，有效期3个月.
同位素内标工作液配制浓度见附表B.3、B.4.
注：使用时.取同位素内标工作液1和2各100uL.用乙腊-水溶液（28）稀释至1mL.得同位素内标混合工作液3.
3.4.5标准系列工作液
分别准确移取混合标准储备液1和2各50.0pL，用乙晴-水溶液（28）稀释至2.0mL，得混合标准储备液3；取100μL混合标准储备液3，用乙晴-水溶液（28）稀释至1.0mL，得混合标准储备液4.
准确吸取混合标准储备液440.0L、200L、400gL、混合标准储备液3200μL、400pL、1000gL，分别用初始流动相稀释到5.0mL，配制成不同浓度点的混合标准工作液.标准系列浓度见附表B.5.
移取100μL同位素内标混合工作液3于棕色小瓶中，加人900gL对应的混合标准系列溶液，于涡旋混合器上混合均匀，配制成混合标准系列工作液，临用现配.
3.5.1一次性微孔滤头：带0.22μm聚四氟乙烯微孔滤膜.
4仪器和设备
4.1液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源.4.3电子天平：感量0.01g和0 000 01g. 4.2高速离心机；转速≥10000r/min.4.4涡旋混合器.4.5振荡器.4.6氮吹仪.4.7高速粉碎机. 4.8组织接碎机.4.9匀浆机.
5分析步骤
5.1试样制备与保存
5.1.1试样制备
品用高速粉碎机粉碎，半固体样品用组织捣碎机捣碎，液体样品用匀浆机匀浆. 检测用的样品量应不低于1kg；当样品量不足1kg时，至少取同一批次的3个包装.其中，固体样
注：根据检验目的可按实际情况取样制备.
5.1.2试样保存
制备后混合均匀的样品均匀分至约100g的多个包装，储存于洁净的容器内，密封后根据样品性质置于2℃C~6C或一18℃及以下避光保存.
5.2试样提取
称取5g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加人20mL乙晴-水-甲酸溶液（70291），涡旋
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振荡30min.10000r/min离心5min.上清液尽可能全部移出.试样里再加人20mL甲醇-水-甲酸溶液（10891)，涡旋振荡30min，10000r/min离心5min.合并两步提取的上清液至同一50mL离心管中，加人甲醇-水-甲酸溶液（10891）稀释至40mL，混匀后，9000r/min离心5min.准确转移0.6mL离心后的上清液至另一1.5mL离心管中，加人0.3mL水、0.1mL同位素内标混合工作液3旋涡混匀后，0.22pm滤膜过滤待进样.
5.3仪器参考条件
5.3.1液相色谱条件
5.3.1.1色谱柱：C18柱（柱长100mm，柱内径2.1mm：填料粒径1.7μm），或等效柱.5.3.1.2柱温：30℃.5.3.1.4流速:0.4 ml/min. 5.3.1.3进样量：3μL.5.3.1.5流动相：A相：2mmol/L碳酸氢铵溶液；B相：甲醇-乙晴溶液（11).5.3.1.6梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱程序
时间 min % A B0 0 95 53 0 89 115 0 83 1711 0 83 1711.1 68 3214 0 68 3214 1 60 4017 0 40 6018 0 40 6021 0 19 0 5 5 95 9521.1 56 524 0 56 5
5.3.2质谱参考条件
离子化模式：电喷雾电离正/负离子模式（ESI/ESI）.多反应监测（MRM），具体参数见附录C.21种真菌毒素化合物及其同位素内标的质谱监测离子见表2.
