NS 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 1110-2002 新城疫病毒分离及鉴定方法 Procedure ofvirusisolationandidentification forNewcastle disease 2002-05-20发布 2002-11-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局
SN/T 1110-2002 前 言 本标准等效采用国际兽医局的标准《诊断方法和疫苗标准手册》（2000年，第四版），并参考农业部 《新城疫检疫技术规范》，结合我们的操作经验编写、制定。
本标准的附录A、附录B均为标准的附录。
本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。
本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。
本标准起草人：单松华、胡永强。
本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。
中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 新城疫病毒分离及鉴定方法 SN/T 1110-2002 Procedure ofvirusisolation and identification forNewcastle disease 1范围 本标准规定了禽类新城疫病毒(NDV)分离及鉴定方法。
本标准适用于禽类新城疫病毒的分离及鉴定。
2引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均 为有效。
标准都会被修改，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
国际兽疫局《诊断方法和疫苗标准手册》（2000年，第四版） 3材料准备 所用试剂均为分析纯。
3.1普通天平、分析天平、普通离心机、V型血凝板、微型振荡器、50μL可调移液器、恒温箱、超净工作 台、塑料采血管等。
3.2抗生素：青霉素、链霉素、庆大霉素和制菌霉素等。
3.39~11日龄无特定病原体(SPF)鸡胚、1日龄SPF鸡和6周龄SPF鸡。
3.4pH7.0或至pH7.40.01mol/L磷酸盐缓冲液（PBS)的配制（见附录A标准的附录）。
3.5阿氏液(红细胞保存液）的配制（见附录B标准的附录）。
3.61%鸡红细胞：采集SPF鸡或无新城疫血凝抑制抗体的成年鸡血，放人等量的阿氏液中，用20倍 体积的PBS洗涤3～4次，每次以2000r/min离心（3～4)min，最后一次5min，用PBS配成1%悬液。
4C保存悬液，在72h内使用完。
3.7拭子准备：将脱脂棉缠于牙签的钝端，使其形成直径0.4cm的脱脂棉球，然后用牛皮纸包扎，每捆 10只，121C高压蒸汽灭菌15min，备用。
或直接购买商品用拭子。
3.8标准新城疫病毒、标准阳性血清：由指定单位供应。
4样品采集和制备 4.1样品采集 4.1.1活禽采集气管拭子和泄殖腔拭子（沾有粪便)；雏禽采集新鲜粪便。
4.1.2死禽采集口鼻拭子、肺、肾、肠（含内容物）、脾、脑、肝、心等组织，样品可单独采集或者混合，肠内 容物常需单独处理。
4.1.3病程长的ND病鸡或非典型ND病例可采集骨髓。
4.1.4将无菌采集的样品装人灭菌的小瓶中，并标记清楚（编号、采样时间)，样品立即送实验室处理或 于一30C冷冻保存。
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局2002-05-20批准 2002-11-01实施 1
SN/T 1110-2002 4.2样品制备 4.2.1取采集样品置于研磨器中磨碎，加人PBS制成10%～20%（W/V)的悬液；采集的拭子浸入 (2～3)mLPBS中，充分振荡，反复挤压，弃去拭子。
4.2.2在不超过25C的室温下，1000r/m离心（10～~15)min。
4.2.3上清液加人抗生素。
使用何种抗生素视具体情况而定，常使用的抗生素终浓度为：青霉素（2000 品，抗生素量提高5倍。
加人抗生素后用0.2mol/L磷酸氢二钠（见附录A1.1)调节pH至7.0～7.4。
4C作用4h或过夜，或室温作用（1～2）h，或37C作用30min，以确保无菌。
或上清液经0.45μm滤膜过滤除菌。
或上清液5000r/m离心10min后，移出上清液，再8000r/m离心10min，取上清液进行下一项 试验。
4.2.4上述除菌液应尽快进行试验。
如没有条件，可在一30C冷冻保存。
5操作方法 5.1病毒分离培养 5.1.1细菌污染检查 将上述除菌液接种于灭菌的普通营养琼脂平板上，37C培养24h，检查有无细菌生长。
当有细菌生 长时，应按4.2.3法，进一步作无菌处理。
5.1.2鸡胚接种 （35~37）℃孵育4~7d。
5.1.3培养物的收集及检测 弃去24h内死亡的鸡胚。
收集24h以后死亡的和频死的...
