SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T3174—2012 向日葵黑茎病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Le ptos phaeria lindquistii Frezzi 2012-05-07发布 2012-11-16实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 SN/T3174-2012 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的贵任. 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本标准起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中国检验检疫科学研究院. 本标准主要起草人：罗加凤、刘跃庭、吴品珊、廖芳、刘鹏、张裕君. 1 SN/T3174—2012 向日葵黑茎病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了向日葵黑茎病菌(Leptosphaeria lindquistii Frezzi)(参见附录A)分离培养、致病性 测定、序列比对的实验步骤及鉴定方法等. 本标准适用于向日葵种子中向日葵黑茎病菌的检疫鉴定以及向日葵产区向日葵黑茎病菌的田间 检测. 2向日葵黑茎病菌基本信息 学名：Leptosphaeria lindquistii Frezzi 无性世代学名：Phoma macdonaldii Boerma. 英文名：Sunflower Phoma black stem 分类地位：向日葵黑茎病菌属真菌界(Fungi) 子囊菌门(Asycota) 腔菌纲 (Leculoasycetes) 格孢腔菌目(Pleosporales) 格孢腔菌科(Pledsporaceae) 小球腔菌属(Lepto- sphaeria);无性态属于有丝分裂孢子真菌(Sphaeropsidales) 腔孢纲(Coelomycetes) 球壳孢目(Spha- eropsidales) 茎点霉属(Phoma). 3方法原理 病原菌分离培养性状、病菌形态学特征、对寄主的致病性、症状表现（参见附录B)及病菌ITS1/ ITS4和ActF1/R1序列比对结果作为向日葵黑茎病菌的检疫定依据. 4器材和试剂 4.1器材 灭菌培养皿（直径90mm~100m)、三角瓶、镊子、手术剪、手术刀、接种针、一次性注射器 (1mL)、棉纱、脱脂棉、酒精灯、塑料研杵、可调微量加样器. 体视显微镜、生物显微镜、超净工作台、培养箱(24℃士1℃)、电子天平（感量0.01g)、高压灭菌 锅、常规冰箱（一20℃）、PCR扩增仪、电泳仪、凝胶成像仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅. 4.2试剂和培养基 乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、TFis-HCl、异戊醇、三氯甲烷、乙醇、氯化钾、氯化 镁、蛋白酶K、引物ITS1/ITS4和ActF1/R1、Taq聚合酶等分子生物学试剂.或用植物组织及真菌基 因组提取试剂盒提取DNA.马铃薯、葡萄糖、琼脂、青霉素、链霉素、乳酸、1.0%次氯酸钠(NaC1O). 酸性马铃薯培养基APDA(PH4.5~5.0)、APDA选择性培养基（参见附录C). 1 ...
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