CCS B 41 ICS 65.020.30
GB 中华人民共和国国家标准 GB/T40253-2021
牡蛎小胞虫病诊断规程显微镜检查组织法 Code of diagnosis for mikrocytosis of oysters-Microscopic methods
2021-05-21发布2021-12-01实施 国家市场监督管理总局发布 国家标准化管理委员会
GB/T40253-2021
前言
本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由中华人民共和国农业农村部提出。
本文件由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。
本文件起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所、全国水产技术推广总站。
本文件主要起草人：白昌明、杨冰、王崇明、黄健、李清、万晓媛、辛鲁生、李晨、余卫忠。
GB/T 40253-2021
牡蛎小胞虫病诊断规程显微镜检查组织法
1范围
本文件规定了牡蛎小胞虫病诊断规程中普遍适用的显微镜检查组织法的要求，针对主要病原马可 尼小胞虫（Mikrocytos mackini），给出了组织印片检测法和组织病理检测法所需试剂或材料、仪器设 备、样品、试验步骤和结果判定。
本文件适用于牡蛎感染马可尼小胞虫的普查和初步诊断；以及牡蛎感染马可尼小胞虫的流行病学 调查和诊断；其他贝类可参照执行。
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单)适用于 本文件。
SC/T7205.1一2007牡蛎包纳米虫病诊断规程第1部分：组织印片的细胞学诊断法 SC/T7209.3一2007牡蛎小胞虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法 3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4缩略语
下列缩略语适用于本文件。
DAFA：戴维森氏乙醇-福尔马林-乙酸固定液（davidson’s alcohol-formalin-acetic acid fixative） 5试剂或材料 5.1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水。
5.2苏木素。
5.3碘酸钠。
5.4钾明矾。
5.5柠檬酸。
5.6水合三氯乙醛。
5.7伊红Y(水溶性)。
5.8焰红B(水溶性）。
5.9石蜡（熔点52℃~54℃）：切片级。
5.10中性树胶：生物染色用。
5.11甲醇。
GB/T 40253-2021 5.12二甲苯。
5.13无水乙醇。
5.1495%乙醇。
5.15甲醛(37%)。
5.16冰醋酸。
5.17吉姆萨(Gimesa)染液。
5.18过滤海水：经纱网（≥200目）过滤的海水。
5.19DAFA固定液：按附录A的A.1配制。
5.20迈尔-班尼特苏木精（Mayer-BennettHematoxylin）染色液：按A.2配制。
5.21伊红-焰红染色液：按A.3配制。
5.2285%乙醇：按A.4配制。
5.2380%乙醇：按A.5配制。
5.2475%乙醇：按A.6配制。
5.2570%乙醇：按A.7配制。
5.2650%乙醇：按A.8配制。
6仪器设备
6.1显微镜：配备高倍镜（40×）和油镜（100×）。
6.2石蜡切片机：满足4μm～7μm厚度的石蜡连续切片要求。
6.3展片水浴锅。
6.4烘片机。
6.5恒温箱。
7样品 7.1采样对象 牡蛎、扇贝和蛤等易感双壳贝类。
7.2采样数量、方法和保存运输 采样数量、方法和保存运输应符合SC/T7205.1一2007附录B的要求。
海水温度低于10C时为采 样的最佳时期。
7.3样品的采集 稚贝（附着后～2mm）和幼贝（2mm~30mm）取内脏团；成贝（>30mm）取闭壳肌和外套膜。
8试验步骤 8.1组织印片检测法 8.1.1印片制作 用解剖刀将样本剖开，用吸水纸轻轻吸去剖面过多的黏液，随后将剖面在载玻片上印迹，制成印片， 自然干燥后滴加甲醇覆盖印片部分，固定5min~7min。
空气干燥。
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GB/T 40253-2021
8.1.2染色 8.1.2.1将干燥的印片移人吉姆萨染液中染色，染色时间约30min。
8.1.2.2用缓慢的自来水流或洗瓶冲洗，去除多余染液。
8.1.2.3室温晾干。
8.1.3封片 滴加2滴中性树胶，封片。
8.1.4观察 ...
