中华人民共和国国家标准
GB/T 36770-2018
Detection and identification ofAustralian grapevineviroid
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.
本标准由全国植物检疫标准化技术委员会（SAC/TC271）提出并归口.
本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京出入境检验检疫局、福建省农科院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局.
本标准主要起草人：邓丛良、张永江、王英超、向均、赵晓丽、谢丽雪.
澳洲葡萄类病毒检疫鉴定方法
1范围
本标准规定了澳洲葡萄类病毒的检疫鉴定方法.本标准适用于可能带有澳洲葡萄类病毒的葡萄累殖材料的检疫鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3澳洲葡萄类病毒基本信息
学名;Australian gra pevine viroid缩写：AGVd分类地位：马铃薯纺锤块茎类病毒科（Pospiviroidae）、苹果锈果类病毒属（Apscaviroid） 异名：澳大利亚葡萄类病毒
澳洲葡萄类病毒的其他信息参见附录A.
4方法原理
类病毒检测主要针对其核酸序列.主要的方法有反转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和核酸分子杂交.
5仪器设备、主要用具和主要试剂
5.1仪器设备
电子天平（感量0.001g）、普通天平（感量0.1g）、高速冷冻离心机、小型瞬时离心机、普通冰箱、超低温冰箱（一80C）、制冰机、涡旋振荡器、磁力搅拌器、高压灭菌锅、pH计、PCR仪、微波炉、电泳仪、电泳槽、凝胶分析成像系统、实时荧光定量PCR仪、杂交炉、塑料薄膜封口机、紫外交联仪、暗箱、摇床、恒 温水浴锅、组织破碎仪等.
5.2主要用具
20pL，200μL，1000μL，5000pL)、无RNA酶离心管（1.5mL，5mL，10mL)、研钵、研棒、磁性分 0）离架、PCR反应管（200pL）、实时荧光96孔反应板、杂交瓶、杂交膜、杂交袋、X光片.
5.3主要试剂
除另有规定外，试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682中相关规定.普通RT-PCR检
GB/T 36770-2018
测试剂见附录B：实时荧光RT-PCR检测试剂见附录C；斑点杂交检测试剂见附录D.
6检测与鉴定
6.1普通RT-PCR检测方法
普通RT-PCR检测方法见附录B.
6.2实时荧光RT-PCR检测方法
实时荧光RT-PCR检测方法见附录C.
6.3斑点杂交检测方法
斑点杂交检测方法见附录D.
7结果判定
定为检出AGVd 样品经普通RT-PCR检测为阳性，且实时荧光RT-PCR检测为阳性或斑点杂交检测为阳性，则判
样品经普通RT-PCR检测为阳性，且序列测定结果与已知的AGVd序列一致，则判定为检出AGVd
AGVd. 样品经实时荧光RT-PCR检测为阳性，且序列测定结果与已知的AGVd序列一致，则判定为检出
8样品保存与结果记录
8.1样品保存
人员的签字：普通RT-PCR检测结果保存电泳照片及测序结果：实时荧光RT-PCR检测结果保存荧光 完整的实验记录要包括：样品的来源、种类、采集时间、实验检测时间、地点、方法和结果，并有实验曲线图及C1值；斑点杂交检测保存照片.
8.2样品保存与处理
离温室中培养，叶片、果实等样品在一80C冰箱内保存.对检出澳洲葡萄类病毒的样品应至少保存 样品经登记人和经手人签字后妥善保存3个月，种子保存在4C冰箱内，生长苗木或插条保存在隔6个月，以备复核、谈判和仲裁.保存期满后，应灭活处理.
附录A
A.1寄主范围
自然条件下侵染葡萄（Vitisinifera）.
A.2病害症状
寄主受AGVd侵染后，多表现隐症.
A.3分布地区
澳大利亚、美国、突尼斯、中国.
A.4传播方式
AGVd主要通过嫁接传播和机械传播，也可通过种子传播.
A.5基因组
AGVd为单链环状的RNA分子，长369个核苷酸残基.
