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SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T7224-2017
鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增 (RT-LAMP）检测方法 Detection method by reverse transcription loop-mediated isothermal amplification forspringviraemia ofcarpvirus
2017-06-12发布2017-10-01实施
中华人民共和国农业部发布
SC/T7224-2017
前言
本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。
本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。
本标准由农业部渔业渔政管理局提出。
本标准由全国水产标准化技术委员会（SAC/TC156）归口。
本标准起草单位：全国水产技术推广总站、深圳市检验检疫科学研究院、深圳出入境检验检疫局、暨 南大学食品安全与研究院。
本标准主要起草人：郑晓聪、贾鹏、李清、王津津、余卫忠、何俊强、于力、刘莹、兰文升、史秀杰、刘、 秦智锋、石磊。
SC/T7224--2017
鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP）检测方法
1范围 本标准给出了鲤春病毒血症病毒逆转录环介导等温扩增（RT-LAMP)检测的技术原理，规定了试 剂和材料、器材和设备、操作步骤及结果判断。
本标准适用于鲤春病毒血症病毒的初筛检测。
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T15805.5鱼类检疫方法第5部分：鲤春病毒血症病毒(SVCV) GB/T18088出人境动物检疫采样 SC/T7103水生动物产地检疫采样技术规范 3缩略语 下列缩略语适用于本文件。
AMV 酶：AMV逆转录酶(avian myelobastosis virus reverse transcriptase) Bst 酶：Bst DNA聚合酶(大片段)[Bst DNAPolymerase(largefragment)] DEPC：焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) dNTP：脱氧核苷三磷酸（deoxyribonucleosidetriphosphate) EDTA：乙二胺四乙酸(ethlenediamine tetraacetic acid) PBS：磷酸盐缓冲溶液（phosphatebuffer saline) RT-LAMP：逆转录环介导等温扩增（reverse transcriptionloop-mediated isothermalamplifica- tion) SVCV：鲤春病毒血症病毒(springviraemiaof carpvirus) 4技术原理 本标准根据SVCV(参见附录A中A.1)基质蛋白基因，设计了4条引物（参见附录B)特异性识别 基因组中的6个区域。
在AMV酶和链置换Bst酶的作用下，63C恒温扩增60min，即可实现SVCV核 酸扩增。
而后，在扩增反应后加人显色液，即可通过观察颜色变化判定结果。
5试剂和材料 5.1水：符合GB/T6682中一级水的规格。
5.2DEPC水：配制方法见附录C中C.1或购买商品化试剂。
5.3磷酸盐缓冲液（PBS)：配制方法见C.2或购买商品化试剂。
5.4Trizol试剂：商品化试剂，4C保存。
5.5三氯甲烷：分析纯，避光常温保存。
5.6异丙醇：分析纯，使用前预冷至一20℃。
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SC/T 7224-2017 5.7引物： SVCV-FIP:5'-CGCTTGTTCCTAGAACCTTTGTAATTTTTCCCTTGAAGACGATGTCAG- 3'，40μmol/L备用； SVCV-BIP:5'-TACAGATTGATCATGTTCCGTTGTGTTTTTGGAATACAAGGCCGACC- 3'，40μmol/L备用； SVCV-F3:5'-GGATATACAATTGGACACC-3',10μmol/L备用； SVCV-B3:5'-ACAACTTCCTTGCACCTT-3',10μmol/L备用。
5.810×ThermoPol缓冲液：商品化产品，内含0.2mol/LTris-HCl、0.1mol/L氯化钾、0.1mol/L 硫酸铵、20mmol/L硫酸镁、1%TritonX-100。
5.9dNTPs：含dATP、dTTP、dCTP、dTTP各 5.10甜菜碱：浓度5mol冻融。
5.11硫酸...
