ICS65.020 B16 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2281-2012 苹果病毒检测技术规范 Protocol for the detection of apple viruses 2012-12-24发布 2013-03-01实施 中华人民共和国农业部发布 NY/T2281-2012 苹果病毒检测技术规范 1范围 本标准规定了苹果病毒检测的抽样与取样要求、检测方法、判定原则. 本标准适用于苹果无病毒母本树、无病毒苗木及苹果植株的苹果花叶病毒(Apple mosaic virus ApMV)、苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leafspot virus ACLSV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pit- ting virus ASPV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus ASGV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid ASSVd)的检测. 2抽样与制样 2.1抽样 2.1.1无病毒母本树 每株均需检测. 2.1.2无病毒苗木 分品种进行抽样.采取随机抽样方法.以666.7m2抽检10株为基数，每增加666.7m2 增检5 株，不足666.7m2的按666.7m2计. 2.1.3苹果植株 对疑似感病的植株每株必检. 2.2制样 2.2.1木本指示植物检测 温室检测时，早春从待检的苹果植株上取一年生芽嫁接到特定指示植物上.田间检测时，夏末秋初 取待检植株离皮绿枝进行芽接. 2.2.2 ELISA和RT-PCR检测 春季取待检苹果植株上幼嫩新鲜叶片；或冬季取休眠枝条的韧皮部组织. 3检测方法 3.1田间症状观察法 检测对象为苹果锈果类病毒和苹果花叶病毒，田间直接观察其症状表现（参见附录A). 3.2木本指示植物检测法 包括温室检测和田间检测. 检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒、苹果花叶病毒和苹果锈果类病毒，具 体操作参见附录B. 3.3酶联免疫吸附法(ELISA) 检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒和苹果花叶病毒，具体操作参见附录 C. 3.4反转录一聚合酶链式反应(RT-PCR) 检测对象为苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒、苹果茎沟病毒、苹果花叶病毒和苹果锈果类病毒，具 体操作参见附录D. 1 NY/T2281-2012 4判定规则 根据附录A~附录D的要求进行检测和判定，如果一个样品采用了2种以上检测方法，且检测结果 不一致，则以阳性结果为准，判定为带毒. 4.1苹果无病毒母本树 检出携带主要检测对象中的任何一种病毒/类病毒，该母本树即判定为不合格. 4.2苹果无病毒苗木 检出某株苗木携带主要检测对象中的任何一种病毒/类病毒，即判定该批苗木不合格. 4.3需要检测的苹果植株 检出携带主要检测对象中的任何一种病毒/类病毒，则判定该株苹果带毒. 2 ...
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