C53 ICS 67.040
GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 5009.118-2008代替GB/T5009.118-2003
谷物中 T-2毒素的测定 Determination ofT-2 toxinincereals
2008-11-21发布2009-03-01实施 中华人民共和国卫生部发布 数码防伪中国国家标准化管理委员会
GB/T5009.118-2008
前言
本标准代替GB/T5009.118-2003《小麦中T-2毒素的酶联免疫吸附测定（ELISA)》。
本标准与GB/T5009.118-2003相比主要修改如下： "-修改了标准的中文名称，标准的中文名称改为“谷物中T-2毒素的测定”； -增加了高效液相色谱法作为第一法。
本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。
本标准由中华人民共和国卫生部负责解释。
本标准负责起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局、中国疾病预防控制中心营养与食品 安全所。
本标准参加起草单位：北京中检维康技术有限公司。
本标准主要起草人：隋凯、李军、卫锋、肖珊珊、杨春光、戚应春、阳传和、罗雪云、计融。
本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 149331994、GB/T 5009.118-2003。
GB/T 5009.118-2008
谷物中T-2毒素的测定
1范围 本标准规定了谷物中T-2毒素的测定方法。
本标准适用于谷物及其制品中T-2毒素的测定。
第一法高效液相色谱测定法 2原理 试样中的T-2毒素用甲醇-水提取后，提取液经免疫亲和柱净化，浓缩、衍生、定容后，用配有荧光检 测器的液相色谱仪进行测定，外标法定量。
3试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相当纯度的去离子水。
3.1甲醇(CHsOH)：HPLC级。
3.2乙晴(CHCN):HPLC级。
3.3甲苯(CHsCH）：HPLC级。
3.4甲醇-水(8+2)：取80mL甲醇，加20mL水。
刻度。
3.7T-2毒素（T-2toxin）标准品：纯度≥98%。
3.8T-2毒素标准溶液：准确称取适量的T-2毒素标准品，用乙配成浓度为0.5mg/mL的标准储备 液，一20℃冰箱中避光保存。
使用前用乙晴稀释成适当浓度的标准工作液。
3.9T-2毒素免疫亲和柱。
3.10玻璃纤维滤纸。
4仪器和设备 4.1液相色谱仪配有荧光检测器。
4.2粉碎机。
4.3高速均质器。
4.4氮吹仪。
4.5离心机。
4.6涡旋混合仪。
4.7空气压力泵。
4.8玻璃注射器：20mL。
4.9天平：感量0.0001g。
GB/T 5009.118-2008
5分析步骤 5.1提取 称取试样50g（精确到0.01g)于500mL玻璃混合杯中，加人100mL甲醇-水（8+2)，高速均质 2min后，3000r/min离心5min，上清液经定量滤纸过滤，移取10.0mL滤液并加人40.0mL水稀释 混匀，以玻璃纤维滤纸过滤，至滤液澄清后，进行免疫亲和柱净化操作。
5.2净化 将免疫亲和柱连接于20mL玻璃注射器下。
准确移取10.0mL（相当于1.0g样品"）的5.1提取 滤液注人玻璃注射器中，将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以1mL/min流速缓慢通过 免疫亲和柱，直至有部分空气通过柱体。
以10mL水淋洗柱子1次，弃去全部流出液，并使部分空气通 过柱体。
加人1.5mL甲醇（3.1)洗脱，流速为1mL/min，收集洗脱液于玻璃试管中，50C以下氮气吹 干，待衍生。
5.3衍生 于5.2净化后的样品中，分别加人50pL4-二甲基氨基吡啶（DMAP)溶液和50μL1-氰酸蕙 （1-AN）溶液，涡旋混合1min，于50℃士2°C恒温水浴中反应15min，在冰水中冷却10min。
50C以下 氮气吹干后。
用1.0mL的流动相[5.4.1b)]溶解，供液相色谱测定。
5.4测定 5.4.1液相色谱条件 a）色谱柱：Ca柱，4.6×150mm（内径），粒度5μm，或相当者； b）流动相：乙晴-水（80+20)； c）流速：1.0mL/min； d）检测波长：激发波长381nm，发射波长470nm； e）进样量：20μL； f）柱温：室温。
5.4.2色谱测定 根据样液中T-2毒素衍生物含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液。
标准工作溶液和样液中 T-2毒素衍生物响应值均应在仪器检测线性范围内。
对标准工作溶液和样液等体积参插进样进行测 定。
在上述色谱条件下，T-2毒素衍生物的保留时间约为9.8min。
T-2毒素衍生物的标准色谱图见 图1。
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