中华人民共和国国家标准
GB/T 37272-2018
尿液中A-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法
Determination of 11-nor-9-carboxy-delta-9-tetrahydrocannabinol in urine-
中国国家标准化管理委员会 国家市场监督管理总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本标准由中华人民共和国司法部提出并归口.本标准起草单位：司法鉴定科学研究院.本标准主要起草人：卓先义、向平、刘伟、严慧、沈保华、马栋、施妍、沈敏.
尿液中A-四氢大麻酸的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了尿液中△-四氢大麻酸的液相色谱-串联质谐（LC-MS-MS）检测方法.
本标准适用于尿液中△-四氢大麻酸的定性分析和定量分析.
2规范性引用文件
件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GA/T122毒物分析名词术语
3术语和定义
GA/T122界定的术语和定义适用于本文件.
4原理
尿液中-四氢大麻酸在碱性条件下水解，然后在酸性条件下用有机溶剂萃取，采用液相色谱-串联质谱法进行检测.
5试剂或材料
所用的试剂，除特别注明者外均为分析纯试剂；水为符合GB/T6682规定的一级水：试剂和材料包括：
a）正已烷.b）乙酸乙酯.d）甲酸：优级纯.e）乙酸铵：色谱纯.f）冰乙酸：优级纯.g）20mmol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵1.54g.置1000mL量瓶中，加水适量，加入甲酸2.0mL， 加水至刻度，摇匀.h）1mol/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠4.0g，加水100mL落解.i）1mol/L盐酸溶液：取浓盐酸20.8mL 加水稀释至250mL.j）-四氢大麻酸对照品溶液：市售100pμg/mL甲醇溶液，置冰箱中冷冻保存.保存时间为 12个月.
c）乙睛：HPLC级.
GB/T 37272-2018
k）-四氢大麻酸对照品工作溶液：试验中所用其他浓度的对照品溶液均从上述对照品溶液用甲醇稀释得到.密封，置于冰箱中冷藏保存.保存时间为3个月.1）内标物-四氢大麻酸-d对照品溶液：市售100pμg/mL甲醇溶液，置冰箱中冷冻保存.保存时间为12个月.m）内标物△-四氢大麻酸-d对照品工作溶液：将内标对照品溶液用甲醇稀释，配制咸10μg/mL 的工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存.保存时间为3个月.n）具塞玻聘试管.o）精密pH试纸.
6仪器设备
仪器设备包括：
a）液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）.b）涡旋振荡器.c）离心机.d）恒温水溶锅. e）精密移液器：10pL~100μL、100μL~1000μL.f）电子天平.
7检测步骤
7.1定性分析
7.1.1样品提取
精密量取待测样品尿液1mL，加人1mL的1mol/L氢氧化钠溶液调至pH13，80C水浴中水解30min，冷却后加人1mL的1mol/L盐酸溶液调至pH7~8，再加人100μL冰乙酸，调至pH4~5，加人3mL正已烷：乙酸乙酯（9：1），混旋，离心，吸取上清液，60C水浴空气流下吹干，残留物中加人200μL乙睛：20mmol/L乙酸铵溶液（91）定容，取5pL供LC-MS/MS检测.
7.1.2添加样品及空白样品
取空白尿液样品1mL两份，一份添加△-四氢大麻酸工作溶液制得15ng/mL添加样品，一份做阴性对照，按上述操作与待测样品平行提取和分析.
7.1.3仪器检测
7.1.3.1液相色谱-串联质谱仪参考条件
以下为参考条件，按照本法所获得的液相色谱-串联质谱图参见附录A中的图A.1，可根据不同品牌仅器和不同样品等实际情况进行调整：
a）色谱柱：MG11C18，3pm，50mm×3mm（内径）或相当者；b）柱温：室温；c）流动相：乙晴：20mmol/L乙酸胺和0.1%甲酸缓冲液（9：1）；d）流速：200μL/min;e）进样量：5pL;
f）离子源：ESI，负离子模式：g）离子喷雾电压：4000V：h）离子源温度：450C；i）检测方式：多反应监测（MRM）；k）-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞能量见表1. j）碰撞气、气帘气等气流值应优化至最优灵敏度：
表1A-四氢大麻酸和内标物的定性离子对、定量离子对、去簇电压（DP）、碰撞能量（CE）
名称 定性离子对 定量离子对 DP/V CE/eV-四氢大麻酸 343/299 80 -28四氢大麻酸-d 343/245 352/308 352/308 80 -28 30
7.1.3.2进样
分别吸取待测样品、空白和添加样品提取液，按7.1.3.1条件进样分析.
7.1.3.3记录和计算
记录各待测样品及添加样品平行进样后-四氢大麻酸的保留时间及峰面积值.
在相同的试验条件下，待测样品中出现两对定性离子对色谱峰，其保留时间与添加样品中四氢大麻酸保留时间比较，相对误差在士2.5%内，且相对离子对丰度比与质量浓度相近添加样品中的相对离子对丰度比之相对误差不超过表2规定的范围，则可判断样品中存在△-四氢大麻酸.
表2定性确证时相对离子丰度的最大允许相对误差
相对离子对丰度比 0S~02 10~20 ≤10允许的相对误差 ±20 ±25 ±30 ±50
7.2定量分析
7.2.1样品提取
取待测样品1mL两份，加人10μL内标工作溶液，余下同7.1.1.
大麻酸，作为添加样品，与待测样品平行操作.
待测样品中△-四氢大麻酸的质量浓度应在工作曲线的线性范围内.
7.2.2仪器检测
仪器参考条件同7.1.3.1.
7.2.3进样
分别取待测样品、系列质量浓度的添加样品，按7.1.3.1条件进样分析.
7.2.4记录与计算
