中华人民共和国国家标准
GB 5009.305-2025
食品安全国家标准
中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局 发布
食品安全国家标准
食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定
1范围
本标准规定了食品中双酚A、双酚F和双酚S的液相色谱-串联质谱测定方法.本标准适用于肉及肉制品、乳及乳制品、水产品、谷物、蛋类、蔬菜、水果、饮料、婴幼儿配方食品和婴幼儿谷类辅助食品中双酚A、双酚F和双酚S的测定.
2原理
试样中的双酚A、双酚F和双酚S，用乙晴或甲醇-水溶液提取，免疫亲和柱净化液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量.
3试剂和材料
除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂
3.1.1乙睛（CHCN）：色谱纯.3.1.2甲醇（CHOH）：色谱纯.3.1.3氯化钠（NaCl).3.1.4磷酸氢二钠（NaHPO）.3.1.5磷酸二氢钾（KHPO）. 3.1.6氯化钾（KCl）.3.1.7盐酸（HCI）：优级纯.
3.2试剂配制
3.2.2磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）；称取8.0g氯化钠、1.2g磷酸氢二钠、0.2g磷酸二氢钾、0.2g 3.2.1盐酸溶液（1090)：量取10mL盐酸，加人90mL水中，混匀.氯化钾，用900mL水溶解，用盐酸溶液（1090)调节pH至7.4±0.1，再加水稀释至1000mL.3.2.4甲醇-水溶液（4060）：量取甲醇40mL，加人水60mL，混匀.
3.3标准品
3.3.1双酚A标准品（CHO，CAS：80-05-7）：纯度≥99.0%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.标准品.
标准品.3.3.4C-双酚A同位素内标（CCHO，CAS：263261-65-0）：100mg/L，或纯度≥98.0%的固体标准品.3.3.5C-双酚F同位素内标（CCHO）：100mg/L，或纯度≥98.0%的固体标准品. 3.3.6C-双酚s同位素内标（CHOS）：100mg/L，或纯度≥98.0%的固体标准品.
3.4标准溶液配制
3.4.1标准储备液（100mg/L）：准确称取双酚A、双酚F和双酚S标准品各10mg（精确至0.1mg）.分 别用甲醇溶解并定容至100mL，混匀.将溶液转移至棕色玻璃试剂瓶中，一18C下避光保存，有效期为12个月，10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀.将溶液转移至棕色玻璃试剂瓶中，-18℃下避光保存，有3.4.3标准混合使用液（双酚A和双酚F：100pg/L;双酚S：10pg/L）：准确吸取双酚A和双酚F的 效期为6个月.标准中间液各1.00mL、双酚S的标准中间液0.10mL.置于10mL容量瓶中，用甲醇-水溶液（4060）定容至刻度，混匀.临用现配.3.4.4同位素内标中间液（1mg/L)：准确吸取"C-双酚A标准溶液、"C-双酚F标准溶液和"C-双酚S标准溶液各0.10mL，分别置于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀.将溶液转移至棕色玻 璃试剂瓶中，一18C下避光保存，有效期为6个月.3.4.5同位素内标混合使用液（C-双酚A和C-双酚F：100μg/L;C-双酚S：10μg/L）：准确吸取"C-双酚A和"C-双酚F中间液各1.00mL、"C-双酚S中间液0.10mL，置于10mL容量瓶中，3.4.6标准系列工作液：分别准确吸取标准混合使用液0.10mL、0.20mL、0.50mL、0.80mL、 用甲醇-水溶液（40十60）定容至刻度，混匀.临用现配.1.00mL、2.00mL于10mL容量瓶中，加人0.50mL同位素内标混合使用液，用甲醇-水溶液（4060）定容至刻度，混匀.标准系列工作液中双酯A和双酚F的质量浓度分别为1.00μg/L、2.00μg/L、5.00μg/L、8.00 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L 双酚 S 的质量浓度分别为0. 100μg/L、0 200μg/ L、0.500μg/L、0.800μg/L、1.00μg/L、2.00μg/L C-双酚A和C-双酚F的质量浓度为5.00μg/LC-双酚S的质量浓度为0.500μg/L.临用现配.
3.4.2标准中间液（1mg/L）：准确吸取双酯A、双酚F和双酚S的标准储备液各0.10mL，分别置于
3.5材料
参见附录A）.
4仅器和设备
4.1液相色谱-串联四极杆质诺仪：配电喷雾离子源.4.2电子天平：感量为0.0001g和0.01g4.3匀浆机. 4.4高速粉碎机.2
4.5超声波振荡器.4.6涡旋混合器.4.7固相萃取装置（带真空泵）.4.8高速冷冻离心机：最高转速≥10000r/min.4.9氮吹仪. 4.10pH计：分度值为0.1单位.
5分析步骤
5.1试样制备
5.1.1固态样品5.1.1.1干样：谷物等固态样品，取可食部分，经高速粉碎机粉碎均匀：乳粉、娄幼儿配方食品和婴幼儿 谷类辅助食品等粉状样品混合均匀.5.1.1.2鲜样：蔬菜、水果、肉及肉制品、蛋类、水产品等样品，取可食部分匀浆均匀.5.1.2液态样品：碳酸饮料超声10min充分排气：液态乳和非碳酸饮料直接摇匀.5.1.3半固态样品：发酵乳等半固态样品搅拌均匀.
5.2试样提取
5.2.1肉及肉制品、水产品、固态及半固态乳制品（乳粉、发酵乳等）、婴幼儿配方食品
称取1g试样（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人50μL同位素内标混合使用液，振荡混合后静置30min.加人2mL水，涡旋振荡30s，再加入5mL乙晴涡旋混合.混合液超声提取 15min，4℃下10000r/min离心10min.取上清液置于玻璃氮吹管中，40℃下用氮气缓缓吹至约2mL，加人8mLPBS混匀，待净化.
5.2.2蛋、乳及液态乳制品
称取1g试样（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人50pL同位素内标混合使用液，振荡混合后静置30min.加人5mL乙，涡旋混合后超声提取15min，4℃下10 000r/min离心 10 min，取上清液置于玻璃氮吹管中，40C下用氮气级缓吹至约2mL，加人8mLPBS混匀，待净化.
5.2.3谷物及婴幼儿谷类辅助食品
称取1g试样（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人50pL同位素内标混合使用液，振荡混合后静置30min.加人10mL甲醇-水溶液（8020），涡旋振荡30s，超声提取15min，4C下10000r/min离心10min.取上清液置于玻璃氮吹管中，40℃下用氮气缓缓吹至约2mL，加人8mL PBS混匀，待净化.
5.2.4蔬菜、水果
称取1g试样（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人100L盐酸溶液（1090）混匀，再加人50μL同位素内标混合使用液，振荡混合后静置30min.加人5mL乙腾，涡旋振荡30s，超声提取15min，4℃下10000r/min离心10min.取上清液置于玻聘氮吹管中，40℃下用氮气缓缓吹至约2mL，加人8mLPBS混匀待净化.
5.2.5饮料
称取1g试样（精确至0.01g），置于2mL聚丙烯离心管中，加人50gL同位素内标混合使用液，振荡混合后静置30min.10000r/min离心10min，取上清液至50mL聚丙烯离心管中，加人10mLPBS混匀，待净化.
注：澄清试样（如纯净水、矿泉水等）可不离心，直接加人PBS混匀.
5.3试样净化
将低温下保存的免疫亲和柱恢复至室温，然后让柱内原有液体自然流尽.取5.2中试样提取液全部过柱，自然流干，弃去全部流出液，再用10mL水淋洗免疫亲和柱，待水滴完后，用真空泵抽干免疫 亲和柱.加人1mL甲醇洗脱，收集洗脱液于玻璃氮吹管中，40C下用氮气缓缓吹干，准确加人0.40mL甲醇，涡族混合10s，再准确加人0.60mL水，涡族混合后转移至2mL聚丙烯离心管中，10000r/min下离心5min，取上清液供液相色谱-申联质谱仪测定.
5.4仪器参考条件
5.4.1液相色谱参考条件
5.4.1.1色谱柱：C柱，100mm×2.1mm（内径），1.7μm（填料粒径），或相当者.5.4.1.2流动相：A相为水，B相为甲醇，流动相梯度条件见表1.5.4.1.3流速：0.3mL/min.5.4.1.4柱温：40℃.5.4.1.5进样量：5μL
表1流动相梯度条件
时间 A相 B相min %0 60 400 5 60 405 0 1006 0 0 1006 1 60 409 0 60 40
5.4.2质谱参考条件
5.4.2.2扫描方式：多反应监测（MRM）. 5.4.2.1电离方式：电喷雾电离，负离子模式.5.4.2.3毛细管电压：2.0kV.5.4.2.4离子源温度：150℃.5.4.2.5脱溶剂气温度：450℃C.5.4.2.6脱溶剂气流量：900L/h. 5.4.2.7定性离子对、定量离子对以及锥孔电压和碰撞能量见表2.
