中华人民共和国国家标准
GB 23200.45-2016
食品安全国家标准 食品中除虫脲残留量的测定 液相色谱-质谱法
National food safety standards
Determination of diflubenzuron residue in foods
Liquid chromatography- mass spectrometry
中华人民共和国农业部 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局
发布
前言
本标准代替SN/T0528-2012《出口食品中除虫豚残留量检测方法高效液相色谱一质谱/质谱法》. 本标准与SN/T0528-2012相比，主要变化如下：一标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式：一标准名称中“出口食品”改为“食品”：一标准范围中增加“其它食品可参照执行”. 本标准所代替标准的历次版本发布情况为：SN ;-SN/T .
食品安全国家标准
食品中除虫脲残留量的测定液相色谱-质谱法
1范围
本标准规定了食品中除虫腺残留的液相色谱-质谱检测方法.
本标准适用于大米、玉米、大豆、小麦、花生（仁）、橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）、蜂蜜、蘑菇（干）、茶、鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝中除虫脲残留量的测定和确证，其它食品可参照执行.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB2763食品安全国家标准食品中农药最大残留限量
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中的除虫豚用乙晴提取，分散固相萃取净化后，用液相色谱-串联质谱仪测定并确证，外标法定量.
4试剂和材料
除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙睛（CHCN）：色谱纯.4.1.2正已烷（CgH）. 4.1.3冰乙酸（CHCOOH）.4.1.4无水乙酸钠（CHCOONa）.4.1.6无水硫酸钠（NaSOg）：650C灼烧4h，贮藏干燥器中备用. 4.1.5氯化钠（NaC1）：450C灼烧4h，密封备用.4.1.7无水硫酸镁（MgSOa：650C灼烧4h，贮藏干燥器中备用.4.1.8N-丙基乙二胺（Primary secondary amine，PSA）：PSA 填料或相当，粒度40 μum 4.1.9十八烷基硅烷键合相（Cs）：C填料或相当，粒度50μm.
4.2溶液配制
4.2.1冰乙酸-乙晴溶液（0.199.9，V/V)：取0.1mlL冰醋酸加入99.9mL乙晴，混匀后备用.4.3标准品
4.4标准溶液配制
mg/mL的标准储备液，置-18C冰箱中保存，保存期为6个月.4.4.2除虫脲标准工作溶液：根据需要用乙晴将标准储备溶液稀释成适当浓度的标准工作液，临用现4.4.30.005mol/L乙酸铵水溶液：称取0.3850g乙酸铵，用水溶解定容到1L，过0.45μm滤膜备 配.
用.
4.5材料
4.5.1微孔滤膜：0.22μm，有机系.
5仪器和设备
5.2分析天平：感量0.01g和0.0001g. 5.1高效液相色谱-串联质谱仪：三重四极杆串联质谱，配有电喷雾离子源（ESI）.
GB 23200.452016
5.3具塞离心管：50ml，聚丙烯旋盖塑料离心管或相当者：10ml，玻璃具塞离心管或相当者.5.5超声波清洗器. 5.4涡旋混合器.5.7样品粉碎机. 5.8组织搞碎机.5.9样品筛：孔径为2mm.5.10高速组织匀浆机.
5.6离心机.
6试样制备与保存
6.1试样制备
6.1.1大米、玉米、大豆、小麦、蘑菇（干）、茶
取代表性样品500g，粉碎后使其全部通过样品筛，混匀后装入洁净容器内，密封并标识.
6.1.2花生（仁）、橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）
取有代表性样品500g，用粉碎机粉碎.混匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明标记.
6.1.3鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝
则需冷冻保存. 样品用组织搞碎机搞碎，充分混匀.取250g搞碎样用高速组织匀浆机匀浆至糊状，若不立即测定
6.1.4牛肉、牛肝、鱼肉、鸡肉
标记. 取有代表性样品500g，取可食部分经搞碎机充分捣碎均匀，装入洁净的盛样容器内，密封并标明
6.1.5蜂蜜
下，低于60C的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温，于常温下保存. 取代表性样品500g，对于无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀.对于有结晶的样品，在密闭的情况注：以上样品取样部位按GB2763附录A执行.
6.2试样保存
粮谷类、坚果类、茶叶等脱水类试样可在常温下密封保存：水果、蔬菜试样应密封冷藏保存，如果不进行立即检测，则需冷冻保存：畜禽肉及其制品需冷冻保存.
容器内并做好标识.含水样品解冻后应充分混匀. 制样和样品保存过程中，应防止样品污染或待测物的含量变化.制备样品应置于洁净、密封
7测定步骤
7.1提取
7.1.1大米、玉米、大豆、小麦、花生（仁）
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加5mL水混匀，放置30min.加入10mL冰乙酸一乙溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30C恒温水浴超声提取30min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，加入 10mL用乙晴饱和的正已烷，振荡5min，静置分层，弃去正已烷层，待净化.
7.1.2橙子、苹果、西芹、洋葱、蘑菇（鲜）、蜂蜜
称取5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中.加5mL水混匀，放置30min.加入10mL冰乙酸一乙晴溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30C恒温水浴超声提取30min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，待净化.
7.1.3蘑菇（干）、茶
称取2.5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中，加10mL水混匀，放置60min.加入10mL
冰乙酸一乙溶液，加入1g无水乙酸钠和2g氯化钠，涡旋振荡2min，30C恒温水溶超声提取30
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min后5000r/min离心10min，上层清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，待净化
7.1.4鸡肉、牛肉、猪肉、猪肝
无水乙酸钠和2g氯化钠，均质2min，30C恒温水溶超声提取30min后5000r/min离心10min，上层 称取2.5g试样（精确至0.01g）于50mL具塞离心管中.加入10mL冰乙酸一乙晴溶液，加入1g清液过装填适量无水硫酸钠漏斗收集于50mL具塞离心管中，加入10mL用乙晴饱和的正已烷，振荡5min，静置分层，弃去正已烷层，待净化.
7.2净化
提取液2.0mL至此离心管中，准确涡旋振荡1min，以5000r/min的转速离心2min.取上清液1mL过 称取0.05gPSA，0.1gC18，0.15g无水硫酸镁置于10mL玻璃具塞离心管中，准确吸取7.1所得0.22um有机微孔滤膜后，供液相色谱-串联质谱测定.
7.3测定
7.3.1液相色谱参考条件
a)色谱柱：Cis柱，150mmx2.1mm（内径）.粒径5μm，或相当者：b）流动相：A（乙），B（0.005mol/L乙酸铵水溶液）.梯度洗脱条件参见附录A中表A.1： c)进样量：10L：d）柱温：30℃：e）流速：0.2ml/min.
7.3.2质谱参考条件
a)离子源：电喷雾离子源（ESI）： b)扫描方式：负离子扫描：c)检测方式：多反应监测（MRM）：d）监测离子对：母离子308.9（m/），定量离子对308.9/288.9（m/z）：定性离子对分别为308.9/288.9 (m/≥)、308.9/92.9 （m/≥);e）其它质谱参考条件见附录A中表A.2和A.3.
7.3.3定量测定
根据样液中待测物的含量，选定浓度相近的标准工作溶液一起进行色谱分析.待测样液中除虫脲的响应值均应在仪器检测的线性范围内.对标准工作溶液及样液等体积参插进样测定.在上述仪器条 件下，除虫保留时间约为7.51min.液相色谱-串联质谱总离子流和质量色谱图参见附录B图B.1.
7.3.4定性测定
按照上述条件测定样品和标准品，样品中待测物色谱峰保留时间与标准品对应的保留时间偏差应一致，允许偏差小于2.5%：并且在扣除背景后的样品谱图中，各定性离子的相对丰度与浓度接近的同样条件下得到的标准溶液谱图相比，最大允许相对偏差不超过表1中规定的范围，则可判断样品中 存在对应的被测物.
表1定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对丰度（基峰） %0520 %至 50 % >10 %至 20 % ≤10 %允许的相对偏差 ±20 % ±25 % %08干 %0S干
7.4空白实验
除不加试样外，均按上述测定步骤进行.
