中华人民共和国国家标准
GB 31657.4-2025
代替 GB/T 23407-2009、GB/T 23410-2009
食品安全国家标准 蜂产品中硝基咪唑类药物及其代谢物 残留量的测定液相色谱-串联质谱法
National food safety standardDetermination of nitroimidazole and metabolites residues in bee products
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会发布国家市场监督管理总局
前言
本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草.
谱/质谱法》、GB/T23407-2009（蜂王浆中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》，与上述标准相比除结构调整和编辑性改动，标准文本格式修改为食品安全国家标准文本格式和标准范围增加药物品种数量外，主要变化如下：
a）与GB/T23410-2009相比，标准范围中增加了蜂王浆的检测，标准灵敏度进一步提高；
b）与GB/T23407-2009相比标准范围中增加了蜂蜜的检测标准灵敏度进一步提高.
本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为：
GB/T 23410-2009 GB/T 23407-2009
食品安全国家标准 液相色谱-串联质谱法
蜂产品中硝基咪唑类药物及其代谢物残留量的测定
1范围
本文件规定了蜂产品中确基咪唑类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱测定方法.本文件适用于蜂蜜和蜂王浆中甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑、2-羟甲基-1-甲基-5硝基咪唑、异丙硝唑、羟基异丙硝唑、洛硝哒唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、苔硝唑、特尼哒唑残留量的测定.
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理
蜂王浆的提取液经固相萃取柱净化后氮气吹干复溶，液相色谱-申联质谱测定，基质匹配标准曲线内标法 蜂蜜和蜂王浆用磷酸二氢钾溶液溶解，残留的药物用乙酸乙酯提取，蜂蜜的提取液氮气吹干后复溶，定量.
5试剂或材料
以下所用试剂除特殊注明外均为分析纯试剂，水为符合GB/T6682中规定的一级水.
5.1试剂
5.1.1甲酸（HCOOH）：色谱纯.5.1.2甲醇（CHOH）：色谱纯.5.1.3乙晴（CH:N）：色谱纯.5.1.4乙酸乙酯（CHO）：色谱纯.5.1.5磷酸二氢钾（KHPO）.5.1.6无水硫酸镁（MgSO）. 5.1.7氯化钠（NaCI）.
5.2.1磷酸二氢钾溶液（0.2mol/L)：取磷酸二氯钾13.6g.用水溶解并稀释至500mL，混匀.5.2.2乙晴溶液；取乙睛10mL和甲酸100L.用水稀释至100mL，混匀.5.2.30.1%甲酸溶液：取甲酸1mL.用水稀释至1000mL混匀.5.2.4甲酸-甲醇-乙睛溶液：取甲醇20mL和甲酸100μl.用乙睛稀释至100mL.混匀.5.3标准品及其纯度：甲硝唑、羟基甲硝唑、地美硝唑、2-羟甲基-1-甲基-5硝基味唑、异丙硝唑、羟基异丙硝唑、洛硝哒唑、氯甲硝咪唑、苯硝咪唑、苔硝唑、特尼哒唑、甲硝唑-C，N、二甲硝咪唑-D、洛硝哒唑
GB 31657. 4-2025
D、羟基异丙硝唑-D和羟甲基甲硝咪唑-D，含量均≥98%，具体信息见附录A.
5.4标准溶液配制
5.4.1硝基咪唑类药物单一标准储备液：取适量的11种硝基咪唑类药物标准品，用甲醇溶解，配制成5.4.2硝基咪唑类药物混合标准中间液：分别准确量取11种硝基咪唑类药物单一标准储备液100gL， 1000mg/L的标准储备液.一18C避光可保存3个月.于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为10mg/L的硝基咪唑类药物混合标准中间液.4C避光可保存1个月，浓度为0.5μg/L、1.Opg/L、2.5μg/L、5.0μg/1.、10.Oμg/L和50.0μg/1的系列混合标准工作液，现用5.4.4硝基咪唑类药物同位素内标物单一标准储备液：分别准确称取硝基咪唑类药物同位素内标物 现配.10mg，用甲醇溶解，并定容至10mL，配制成1000mg/L的标准储备液.-18C避光可保存3个月.标准储备液100uL，于10mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配制成浓度为10mg/L的硝基咪唑类药物同位素内标混合标准中间液.4℃避光可保存1个月.
中间液，用甲醇稀释，配制成浓度为100pg/L的硝基味唑类药物内标混合标准工作液，现用现配.
5.5.1亲水亲脂平衡型固相萃取柱；500mg/6mL，或相当者.5.5.2微孔尼龙滤膜；0.22m.
6仪器和设备
6.1液相色谱-串联质诺仪：配有电喷雾电离源.6.2涡旋振荡仪.6.3高速离心机：转速不低于10000r/min.6.4氮吹仪.6.5分析天平：感量0.000 01g和0.01g- 6.6移液器;10 μL 20 yL.200 pl.、1 000 pl.、5 000 μl.
7试样的制备与保存
7.1试样的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试蜂产品，将其搅拌均匀.对有结晶的蜂蜜样品在密闭情况下置于不超过60℃的水浴中解晶，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温，制备好的试样置于样品瓶中，密封，并 做上标记.
a）取均质后的供试样品，作为供试试样；b）取均质后的空白样品，作为空白试样；c）取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试样.
7.2试样的保存
蜂蜜样品于室温下避光保存：蜂王浆样品于一18℃下保存.
8测定步骤
8.1样品前处理8.1.1蜂蜜 2
