中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准 水产品中大环内酯类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
Nationalfood safety standard-
Determination of macrolides residues in fishery products by liquid
chromatography-tandem mass spectrometricmethod
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
水产品中大环内酯类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法
1范围
螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量检测的制样和液相色谱-串联质谱 本标准规定了水产品中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、测定方法.
本标准适用于水产品中鱼、虾、蟹、贝类等的可食组织中竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素9种大环内酯类药物残留量的检测.
2规范性引用文件
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中大环内酯类药物的残留经乙腊提取，正已烷除脂、中性氧化铝柱净化，液相色谱-串联质谱法测定，外标法定量.
4试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.4.1.2甲醇（CHOH）：色谱纯.4.1.3正已烷（CgHa）：色谱纯.4.1.4甲酸（HCOOH）：色谱纯.4.1.5乙酸铵（CH COONH）.4.1.6异丙醇（CH）CHOH.
4.2溶液配制
4.2.1乙晴饱和正已烷：取正已烷200mL于250mL分液漏斗中，加入适量乙晴后，剧烈振摇，待分配平衡后，弃去乙晴层即得.
4.2.20.05mol/L乙酸铵溶液：取乙酸铵0.77g，用水溶解并稀释至200mL.4.2.30.1%甲酸溶液：取甲酸1mL，用水溶解并稀释至1000mL.4.2.4定容液：取乙躺20mL和乙酸铵溶液80mL，混合均匀.
4.3标准品
竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、交沙霉素、螺旋霉素、替米考星、泰乐菌素含量均≥92.0%，吉他霉素含量≥72.0%，具体见附件A
4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取竹桃霉素、红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙霉素、螺旅霉素、替米考星和泰乐菌素标准品各适量（相当于各活性成分约10mg），精密称定，分别于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为100μg/mL大环内酯类 药物标准贮备液.红霉素、克拉霉素和泰乐菌素-20C以下避光保存，竹桃霉素、阿奇霉素、吉他霉素、交沙毒素、螺旋霉素、替米考星4C以下避光保存，有效期3个月.
4.4.2混合标准工作液：精密量取标准贮备液各1mL，于10mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，配制成浓度为10pg/mL大环内酯类药物混合标准工作液.4C以下避光保存，有效期1个月.
4.5材料
4.5.1中性氧化铝固相萃取柱：2g/6mL，或相当者.
4.5.2尼龙微孔滤膜：0.22pm.
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.5.3氮吹仪.5.4旋涡混合器：3000r/min.5.5移液枪：200μL，1mL，5mL.5.6离心机：4000r/min.5.7梨形瓶：100mL.5.8超声波振荡器.5.9旋转蒸发器.
6试料的制备与保存
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质.
GB31660.1-2019
一取均质后的供试样品，作为供试试料.一一取均质后的空白样品，作为空白试料.一取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料.
6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测.
7测定步骤
7.1提取
取试料5g（准确至土20mg），于50mL塑料离心管，加入乙晴20mL，于旋涡混合器上以2000r/min旋涡1min，超声5min，以3500r/min离心6min，取上清液转移至另一离心管中，残渣再加乙15mL，重复提取一次，合并上清液，备用.
7.2净化
中性氧化铝固相萃取柱预先用乙晴5mL活化，取备用液过柱，用乙晴5mL洗脱，收集洗脱液于梨形瓶中，加入异丙醇4mL，40C旋转蒸发至干.精密加入定容液2mL溶解残余物，加乙晴饱和正已烷2mL，转至10mL离心管中，旋涡10s，以3000r/min离心8min，取下层清液过0.22pm滤膜，供液相色谱-串联质谱测定.
7.3基质匹配标准曲线的制备
精密量取混合标准工作液适量，用空白样品提取液溶解稀释，配制成大环内酯类药物浓度为1 ng/mL、5 ng/mL、20 ng/mL、100 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL和11 000 ng/mL的系列基质标准工作溶液：现配现用.以特征离子质量色谱峰面积为纵坐标，标准溶液浓度为横 坐标，绘制标准曲线.求回归方程和相关系数.
7.4测定
7.4.1液相色谱参考条件
a）色谱柱：Cn色谱柱（150mmx2.0mm，5pm）或相当者：b）流动相：A：0.1%的甲酸水溶液，B：乙睛，梯度洗脱程序见表1：c）流速：0.2mL/min;d）柱温：30℃；e）进样量：10gL.
表1流动相梯度洗脱条件
u “[ 0.1%甲酸水溶液，% 乙睛，%0 95 52 95 510 11 95 5 95 516 95 5
7.4.2质谱参考条件
