中华人民共和国国家标准
食品安全国家标准 动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕 酮残留量的测定液相色谱-串联质谱法
Nationalfood safety standard-
Determination of megestrolacetate and medroxyprogesterone acetateresidues in animal derived foods by liquid chromatography-tandem mass
spectrometry
中华人民共和国农业农村部中华人民共和国国家卫生健康委员会国家市场监督管理总局
发布
前言
本标准系首次发布.
食品安全国家标准
动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的测定 液相色谱-串联质谱法
1范围
本标准规定了动物性食品中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留检测的制样和液相色谱一串联质谱测定方法.
本标准适用于猪、牛、羊肌肉、脂肪、肝脏、肾脏和牛奶中醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮残留量的检测.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的.凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3原理
试样中残留的醋酸甲地孕酮和醋酸甲羟孕酮经乙晴提取，正已烷除脂，混合阳离子柱净化，甲醇洗脱，液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量.
4试剂与材料
除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
4.1试剂
4.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.4.1.2甲醇（CHOH）.4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯.4.1.4乙酸（CHCOOH）4.1.5正已烷（CH）.4.1.6乙酸乙酯（CHCOOCH）.4.1.7乙酸铵（CHCOONH）.4.2溶液配制
4.2.10.2mol/L乙酸铵缓冲液：取乙酸铵15.4g，加水900ml使溶解，用乙酸调pH值至5.2，加水稀释至1000mL.
4.2.22%甲酸水溶液：取甲酸2mL，加水溶解并稀释至100mL.
4.2.30.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL，加水溶解并稀释至1000mL.
4.2.450%甲醇水溶液：取甲醇50mL，加水溶解并稀释至100mL.
4.2.530%甲醇水溶液：取甲醇30mL，加水溶解并稀释至100mL.
4.2.60.1%甲酸水乙溶液：取0.1%甲酸水溶液20mL，加乙晴溶解并稀释至100mL，混匀.
4.3标准品
4.3.1醋酸甲地孕酮（Megestrol acetate CHzO4 CAS:595-33-5）、醋酸甲羟孕酮（Medroxyprogesterone acetate CHO4CAS:71-58-9），含量均≥98.0%.
4.3.2内标：尔代醋酸甲地孕酮（megestrol acetate-Ds.C2HD;O4），含量≥98.0%.
4.4标准溶液制备
4.4.1标准贮备液：取醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮标准品各约10mg，精密称定，于100mL棕色量瓶中，用乙腊溶解并稀释至刻度，配制成浓度为0.1mg/mL的醋酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮标准贮备液.-20℃保存，有效期6个月.
4.4.2内标贮备液：取氛代醋酸甲地孕酮标准品约10mg，精密称定，于100mL棕色量瓶中，用乙晴溶解并稀释至刻度，配制成0.1mg/mL的氛代醋酸甲地孕酮贮备液.-20C保存，有效期为6个月.
4.4.3混合标准工作液：精密量取酷酸甲地孕酮、醋酸甲羟孕酮标准贮备液各0.5mL，于 50mL棕色量瓶中，用乙稀释至刻度，配制成浓度均为1μg/mL混合标准工作液.4C以下避光保存，有效期1个月.
4.4.4内标工作液：精密量取内标贮备液0.5mL，于50mL棕色量瓶中，用乙晴稀释至刻 度，配制成浓度为lug/mL的内标标准工作液.4C以下避光保存，有效期1个月.
4.4.5标准曲线的制备
精密量取适量混合标准工作液及内标标准工作液，用流动相稀释配制成浓度为2、5、25、 50、100ng/mL的系列标准溶液（内标均为20ng/mL）.以特征离子质量色谱峰面积比为纵坐标，标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线.
4.5材料
4.5.1混合阳离子固相萃取柱：60mg/3mL，或相当者.
4.5.2β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶.
4.5.3微孔滤膜：0.22μm
5仪器和设备
5.1液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源.5.2分析天平：感量0.00001g和0.01g.5.3氮吹仪.5.4旋涡混合器：3000r/min.5.5超声波萃取仪.5.6移液枪：200μL，1mL，5mL.5.7离心机：10000r/min.5.8梨形瓶：100mL.5.9旋转蒸发器.5.10固相萃取装置.
6试料的制备与保存
6.1试料的制备
取适量新鲜或解冻的空白或供试组织，绞碎，并使均质.脂肪组织于60℃水溶中融化.
一一取均质后的供试样品，作为供试试料.一一取均质后的空白样品，作为空白试料.一一取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准工作液，作为空白添加试料.
6.2试料的保存
-18℃以下保存，3个月内进行分析检测.
7测定步骤
7.1酶解
铵缓冲液4mL，涡旋混匀后加入β-盐酸葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶40uL，于37C下避光水 取试样2g（准确到土20mg），于50mL离心管中，加内标工作液40uL，加0.2mol/L乙酸浴低速振荡，酶解12h.
7.2提取
7.2.1肌肉、肝脏、肾脏组织
试样经酶解后，加乙酸乙酯10mL，于旋涡振荡器上剧烈振荡10min，4000r/min离心5min，取上清液至梨形瓶中.残渣加乙酸乙酯10mL重复提取1次，合并上清液，50℃旋转蒸发至干.加乙晴10mL、正己烷5ml使溶解，转至50ml离心管中，低速涡旋10s，3000r/min
