中华人民共和国农业行业标准
NY/T 3626-2020
西瓜抗枯萎病鉴定技术规程
Technical code ofpracticefor evaluation ofwatermelonresistance toFusariumwilt
中华人民共和国农业农村部发布
建共服务卡 食典通本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起章 本标准由农业农村部种植业管理司提出并本标准起草单位：中国农业科学院郑州果树本标准主要起草人：吴会杰、古勤生、彭斌、康保珊、刘丽锋.
西瓜抗枯菱病鉴定技术规程
1范围
本标准规定了西瓜对枯萎病（参见附录A）的抗病性评价方法.
本标准适用于西瓜抗枯萎病室内苗期抗病性鉴定.
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的用鸭注件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件
NY/T1857.3黄底抗拮要 TANDA
3术语和定义
4原理
5材料与方法
5.1材料
5.1.2品种
获得. 抗病对照品种 G 中期库（河南郑州）
5.1.3培养基
马铃薯葡萄糖琼脂坪 (PD）
5.1.4其他材料
温培养箱、超净工作台、高压灭菌销、冰 培养皿（直径大小为90mm） 250ml 可控温温室（温度保 鞭子、酒精灯、脱脂棉、育苗盘等实验耗材：恒 5C~30℃）、微波炉、电磁炉等实验仪器.
5.2方法
5.2.1PDA培养基制备
彻底溶化后，再加人葡萄糖15g，搅拌均匀并溶解后，加自来水至总体积为1000mL，分装于250mL三角 称取洗净去皮的马铃薯200g，切成小块，加水1000mL煮沸0.5h.纱布过滤，加人琼脂粉15g.加热瓶，121°C0.1MPa灭菌20min，随后倒人90mm培养皿备用.
5.2.2PDB培养液制备
PDA培养基（5.2.1）中不加人琼脂粉，其他成分都相同的培养基为PDB培养液.
5.2.3麦粒沙培养基制备
脱壳后的麦粒（从普通超市购买），沙粒粒径大小为1mm~3mm.煮熟的麦粒与沙粒按质量比1：2混匀，装人250mL三角瓶或广口瓶，占瓶体积的1/3.121°℃0.1MPa灭菌30min，现用现配.
NY/T 3626-2020
5.2.4病原菌扩繁
d.待菌落长出后再转接到新的PDA培养基上生长，培养7d~10d备用.
5.2.5伤根接种法孢子悬浮液的制备
取生长旺盛的西瓜枯萎病菌菌丝，接种于PDB液体培养基中，在28℃摇床里振荡培养7d～10d后，将振荡培养后的菌液用双层纱布过滤，去掉菌丝，滤液以3000r/min离心，去除上清液，用无菌水重悬，用血球计数板统计病原菌孢子的数目，调至孢子悬浮液浓度为每毫升1×10个孢子，现用现配.
5.2.6鉴定材料育苗
用47%春雷霉素王铜可湿性粉剂按1000倍加人55℃温水中浸种6h，用干净的湿纱布包好，置于28C催芽，待种子胚根长至0.5cm、85%的种子露白后播种.播种时，将种子轻轻放入培养体或育苗盘，覆盖潮土1cm，温度控制在25℃~30℃.
5.2.7土壤或基质接种法
采用PDA培养基繁殖病菌，再用麦粒沙培养基扩大培养，制备菌土，需要鉴定的品种直接播种于菌土中，同时播种对照品种.
5.2.8伤根接种法
取3叶或4叶期生长状态一致、健壮的西瓜幼苗，用清水冲洗根部的土壤，在取苗和冲洗过程中会在10min～15min，处理后的瓜苗定植于育苗体内.设清水伤根接种为对照. 根部造成伤口，将冲洗干净带伤口的幼苗根部浸泡于浓度为每毫升1×10个孢子的病原菌孢子悬浮液中
5.2.9病原菌在麦粒沙培养基中扩繁
将在PDA上生长状态旺盛的西瓜枯萎病病原菌用直径0.6cm的打孔器打取菌饼.取10块菌饼均匀地接种到麦粒沙培养基中.28℃培养，每隔2d充分摇匀，培养10d~15d.
5.2.10菌土制备
土壤或基质采用121C0.1MPa灭菌2h.将病原菌生长充分的麦粒沙培养基捣碎，按照2%的质量比，与灭菌的土壤或基质充分混匀，制成土壤或基质菌土，分装至培养钵或育苗盘，现用现配.
6抗病性鉴定
6.1鉴定设计
每份待测材料重复3次，每次重复选取生长健壮、长势一致的待测材料不少于20株幼苗，用于抗病性鉴定.
6.2接种后幼苗培养条件
两种方法接种后的鉴定材料在温室生长，温度控制在25℃～30℃，正常水分管理.
7病害调查及抗病性分级
7.1病害调查
7.1.1调查时间
接种后第15d开始调查，每隔5d调查一次，直至感病对照品种发病率达80%止.
7.1.2调查方法
记录待测西瓜品种的发病情况，健株数及总株数等记人西瓜抗枯萎病鉴定调查表，计算发病率.
7.2抗病性评价
7.2.1发病率计算
根据调查数据，记录西瓜枯萎病品种抗病性鉴定调查表（参见附录B）.
按式（1）计算.
= b-a×100 b (1)
式中：
发病率，单位为百分号（%）；α一健株数，单位为株.
b一总株数，单位为株；
7.2.2抗病性分级标准
枯萎病抗病性分级标准用发病率的高低评价.p<20%为高抗（HighResistance，HR）；20%≤p<50%为中抗（MiddleResistance，MR）;50%≤p<80%为轻抗（SlightResistance，SR）；p≥80%为感病(Susceptible S). 7.2.3鉴定有效性判别 感病对照材料p≥80%，且抗病对照材料p<20%，该批次抗枯萎病鉴定结果视为有效. 8鉴定记录 鉴定结果报告单需要出具鉴定单位、地点及时间等，报告格式参见附录B.
