中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T1059.6--2016代替SN/T 1059.6-2008
出口食品中沙门氏菌属检测方法 第6部分：垂直膜过滤法
Detection ofSalmonellaeinfood for export-Part 6:Verticalmembrane filtingmethod
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
SN/T1059共分为7个部分：
SN/T1059.1进出口食品中沙门氏菌滤膜筛选法：SN/T1059.2进出口食品中大肠菌群、大肠杆菌计数滤膜/MUG法： SN/T1059.3进出口食品平板菌落计数滤膜法：SN/T1059.4进出口食品中大肠杆菌检验方法谷氨酸脱酬法；SN/T1059.6出口食品中沙门氏菌属检测方法第6部分：垂直膜过滤法：本部分为SN/T1059的第6部分. SN/T1059.7进出口食品中沙门氏菌检测方法实时荧光PCR法.本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.本部分与SN/T1059.6-2008相比，主要技术变化如下：修改了标准的中英文名称： 修改了标准的范围（见第1章，2008年版第1章）：修改了规范性引用文件（见第2章，2008年版第2章）：修改了样品制备和增菌培养（见7.1）；修改了培养基（见附录A，2008年版附录A）.本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口. 本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局.本部分主要起草人：吴斌、刘淑艳、蔡晓萍、于畅、张雪.本部分所代替标准的历次版本发布情况为：-SN/T1059.6-2008
出口食品中沙门氏菌属检测方法 第6部分：垂直膜过滤法
1范围
SN/T1059的本部分规定了出口食品中沙门氏菌属-垂直膜过滤检验方法. 本部分适用于出口食品中沙门氏菌属的检验
2规范性引用文件
凡是注日期的弥用文件，仅注日期的版本适用于本文件.凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件. 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.
GB4789.4食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌检验
3原理
本方法是基于垂直过滤的方式使测试样昌通过包被有特别沙门氏菌抗体的膜，样品中的沙门氏菌抗原与膜上抗体结合通过酶偶合物将抗原抗体结合物显色 若是阳性样品，试剂中央出现蓝色的圆
点，反之为无色的圆点.
4设备与材料
4.1滤器：备有预滤器.4.2真空泵.4.3滤膜：有机相或水相，孔径0.45 4.4培养箱：36℃±1C.42 ±1C.4.5水浴箱：45℃±1℃.36℃ C4.6吸管：1mL、10mL，具刻度.4.7锥形瓶：容量250mL.500ml.4.8试管：17mm×170mm 4.9玻璃珠：5mm.4.10平Ⅲ：直径90mm.
4.11天平：感量0.1g.
4.12均质器.
5培养基和试剂
5.2RVS肉汤：见A.2.
5.1缓冲蛋白陈增菌液（BPW）：见附录A中A.1.
5.3MKTTn肉汤：见A.3.
SN/T 1059.6-2016
5.4木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见A.45.5亚硫酸键（BS）琼脂：见A.5.5.6HE琼脂：见A.6.5.7四乙酸二氨基乙烷（EDTA）；0.2mol/L. 5.8沙门氏菌检测膜.5.9检测膜配套溶液：见A.7.
6检验程序
检验程序见图1.
图1沙门氏菌属垂直过滤法检验程序
7操作步骤
7.1样品制备和增菌培养
7.1.1如为冷冻样品，应在45C以下不超过15min，或在2℃～5℃不超过18h解冻.若不能及时检验，应置于一15℃左右保存.非冷冻而易腐的食品，置于4C冰箱保存.
质1min~2min，或置于盛有225mLBPW的灭菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min~2min.若样品为液态，不需要均质，报荡混匀.无菌操作将样品转至500m1无菌锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36C水浴培养18h士2h.进行前增菌.
7.1.3轻轻摇动培养过的样品混合物，移取0.1mL.转种于盛有10mLRVS肉汤的无菌试管中，混合均匀，于41.5C±1C培养24h±3h；或移取1mL，转种于10mLMKTTn肉汤的无菌试管中，混合均 匀，于36C士1C培养24h土3h，进行选择性增菌.
Z
7.2分离
用接种环取选择性增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板），于36C±1C分别培养18h~24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板）或培养40h~48h（BS琼脂 平板），观察各个平板上生长的菌落.沙门氏菌典型菌落特征为：BS琼脂上，菌落为黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色：有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变.HE琼脂上，菌落为蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色.XLD琼脂上，菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落，有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心，
7.3鉴定
7.3.1吸取250pL.PBS缓冲液至玻璃试管中.7.3.2从选择性平板上挑取5个典型菌落，移至试管中，混合均匀制成样品液，室温培养（25C）10 min. 7.3.3加人800pL0.5%吐温20磷酸盐缓冲液于样品液中，并均匀混合.7.3.4加人200pL样品液至膜上.7.3.5加人250pL0.2mol/LEDTA溶液.7.3.6加人250pLTMB底物溶液.7.3.7加人100pL2mol/L硫酸溶液，终止反应. 7.3.8着色后稳定儿秒后判读结果：应在5min内读取结果，否则无效.7.3.9检测过程中同时设置阴、阳性对照，以沙门氏菌纯培养物为阳性对照，实验用水为阴性对照.
8结果判定
8.1质控
阴性对照结果应为无色.阳性对照结果应为蓝色.
8.2结果判定
在符合8.1的情况下，被检样品进行检测时，如检测膜呈现均匀的蓝色，没有斑点，可以看到整个测试区域表面，判为沙门氏菌属筛选阳性.否则，判为沙门氏菌属筛选阴性.
筛选阴性的被检样品报告未检出，筛选阳性的被检样品，按照GB4789.4进行确证，报告以该检测结果为准，
