中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1607-2017代替SN/T1607-2005
出口饮料中菌落总数、大肠菌群、 粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法 疏水栅格滤膜法
Total bacterial count coliforms fecal coliforms and Escherichia coli countsin drinks for exportHydrophobic grid membrane filtration（HGMF）method
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草.
本标准与SN/T1607-2005相比主要技术变化如下：
增加了术语和定义；修改了范围、方法提要；一细化了试样制备：在计数时采用了最近似值；增加了结果的报告方式.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局.本标准主要起草人：韩伟、许镇整、宁雪.本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN/T1607-2005.
出口饮料中菌落总数、大肠菌群、 粪大肠菌群、大肠杆菌计数方法 疏水栅格滤膜法
1范围
本标准规定了出口饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群相大肠杆菌的计数方法疏水栅格滤膜法.
本标准适用于出口包装饮料中菌落总数、大肠菌群、粪大肠菌群、大肠开菌的计数.
2术语和定义
下列术语和定义适用于本文件.
2.1
疏水栅格滤膜hydrophobicgrid membrane filtration:HGMF
孔径为0.45μm的微孔滤膜，其表面采用无毒疏水材料印有网格，形成和已知大小和数量相等的小方格.
2.2
最近似值mostprobablenumber
基于概率理论估算细菌浓度的一 种间接计数方法
3方法提要
后，菌落在栅格之内量限定生长，计数含特定菌落的棚格数，并通过指定公式换算出细菌的最近似数值. 一定量的饮料样液通过疏水栅格逃膜时，其中的细菌被截留在蔬水栅格内，在指定培养基上培养
4设备和材料
除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下.
4.1疏水栅格滤膜：孔径为0.45μm.4.2疏水榻格滤器.4.3抽滤设备.4.4培养箱：36℃±1℃，44.5℃±0.5℃.4.5无菌吸管：1.0mL和10.0mL.分刻度分别为0.1mL和1.0mL.
5培养基和试剂
除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水.
5.1胰化大豆坚固绿琼脂（TSAF）：见附录A中A.1.
SN/T 1607-2017
5.2m-FC琼脂：见A.2.5.6无菌生理盐水.
5.3胰化大豆硫酸镁琼脂（TSAM）：见A.3.5.4胰蛋白陈胆汁琼脂（TBA）：见A.4.5.5呵噪试剂，见A.5.
6试样制备
6.1细菌含量较低的样品可用无菌量筒量取50mL直接过滤.
6.2细菌含量较高的样品，用无菌生理盐水将样品制成一系列10倍递增的样品稀释液，根据对污染情 况的估计，选择适宜的稀释度用于检验.通常采用1100的稀释液，可得出2/mL~10000/mL的计数范围，若预估计数较高，可用较高稀释倍数的稀释液.制备样品全过程不应超过15min.取50mL样品稀释液过滤.
6.3若饮料样渡中含有可干扰过滤的较大颗粒物，应经粗滤去除后再过滤.
7测定步骤
7.1过滤
将灭过菌的油器连接到抽滤装置上，用无菌镊子夹取滤膜，将其放置在滤器底部，栅格面向上，用滤器配套的夹子固定.无菌移取50mL样液至滤器内，打开滤器阀门和真空泵电源进行抽滤；当全部样液滤过后，加10mL~15mL无菌生理盐水至滤器，重复抽滤步骤；当全部液体通过滤膜后，关闭阀门和 真空泵电源，松开夹子，打开滤器，用无菌镊子夹住滤膜边缘部分取出.
7.2菌落总数测定
7.2.1培养
将7.1的滤膜移放到膜化大豆坚固绿琼脂平板（TSAF）上，栅格面向上，滤膜与琼脂应完全贴紧，两者间不得留有气泡.36C土1C培养48h土2h.
7.2.2计数
除去一个菌落很明显地扩散于相邻方格，应按一个阳性方格计算，计数含有一个或更多菌落的方格为阳性方格，按式（1）求得每毫升样品中的菌落总数最近似值（MPN）：
0S/aX（-N)N]oXN=NdN
式中：
N--滤膜上的方格总数： x--阳性方格数；D---稀释倍数.
7.3大肠菌群测定
7.3.1培养
将7.1的滤膜移放到m-FC琼脂平板上，栅格面向上，滤膜与琼脂应完全贴紧，两者间不得留有气泡.36C±1℃培养24h±2h
7.3.2计数
蓝色菌落，包括部分呈蓝色或底部呈蓝色的菌落为阳性菌落.计数含阳性菌落的方格数，并以此数值为x，按式（1）求得每毫升样品中的大肠菌群最近似值（MPN）.
7.4粪大肠菌群测定
7.4.1培养
将7.1的滤膜移放到膜化大豆硫酸镁琼脂平板（TSAM）上，概格面向上，滤膜与琼脂应完全贴紧，两者间不得留有气泡.36C±1C培养4h~5h，然后将滤膜移至m-FC琼脂平板上，44.5C士0.5℃培养24h±2h.
7.4.2计数
蓝色菌落，包括部分呈蓝色或底部呈蓝色的菌落为阳性菌落.计数含阳性菌落的方格数，并以此数值为x，按式（1）求得每毫升样品中的类大肠菌群最近似值（MPN）.
7.5大肠杆菌测定
7.5.1培养
两者间不得留有气泡.36C±1C培养4h~5h.然后将滤膜移至胰蛋白胆汁琼脂平板（TBA）上， 将7.1的滤膜移放到胰化大豆硫酸镁琼脂平板（TSAM）上，栅格面向上，滤膜与琼脂应完全贴紧，44.5C±0.5C培养24h±2h.
7.5.2吲噪试验
混合等体积的A液和B液制成呵噪试剂，将无菌滤纸放在无菌培养血盖中，在滤纸上滴加1mL~2mL吲噪试剂使之完全浸润：将经7.5.1培养的滤膜移放到滤纸上，滤膜和滤纸应完全贴紧，两者间不得留有气泡：室温下保持10min~15min，再将滤膜移回胰蛋白胆盐琼脂平板（TBA）上.
7.5.3计数
粉红色或深红色菌落为阳性菌落，计数含阳性菌落的方格数，并以此数值为x，按式（1）求得每毫升样品中的大肠杆菌最近似值（MPN）.
8报告
按7.2.2、7.3.2、7.4.2和7.5.3计数，报告结果每毫升样品中的目标菌的最近似值（MPN）.若稀释度的滤膜上均无菌落生长，报告为MPN10000乘以最高稀释倍数表示.
