中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T4786-2017
出口酱油中胱氨酸的测定
Determination of cystine in soy sauce for export
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草.本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口.本标准起草单位：中华人民共和国海南出人境检验检疫局. 本标准主要起草人：蒋林蓉、庞道标、王朝政、程立媛、卓海华、王玉健、黄杰英.
5仪器和设备
5.1液相色谱-质谱/质谱仪：配电喷雾离子源.5.2分析天平：感量为0.001g，最大量程为110g. 5.3涡旅混合器.5.4冷冻离心机：最高转速11000r/min.
6试样制备和保存
未开封的酱油样品可于常温阴暗处保存，已开启的酱油样品，于冰箱4C冷藏存放.
7测定步骤
7.1样品前处理
25mL，混匀，转出至50mL具盖离心管中.4℃下以9000r/min离心5min.移取1mL上清液于已 称取约1g酱油样品（精确到0.001g），置于25mL容量瓶中，加人1mL水后，用甲醇定容至加有100mgPSA吸附剂（4.14）和100mgC18吸附剂（4.15）的15mL螺旋盖聚丙烯离心管中，涡旋混匀1min，4℃下以5000r/min离心5min，过0.22μm微孔滤膜（4.13），供液相色谱-质谱/质谱仪分析，
7.2测定
7.2.1色谱参考条件
色谱参考条件如下：
a）色谱柱：HILIC柱，100mmX2.1mm，粒度3μm或相当者；b）流速：1.0mL/minc）柱温：40℃；d）进样量：20μL；e）流动相：乙晴-0.1%甲酸溶液（4.6），梯度洗脱程序见表1.
表1梯度洗脱条件
时间/min 乙晴/% 0.1%甲酸溶液/%0 95 53 0 50 503.5 50 508 95 510 95 5
7.2.2质谱参考条件
质谱参考条件如下：
a）离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI）；b）质谱扫描方式：多反应监测（MRM）；c）其他参考质谱条件参见附录A.d）胱氨酸的定性离子对、定量离子对见表2.
表2胱氨酸的定性离子、定量离子
化合物 母离子（m/z） 定量子离子（m/z） 定性子真子（m/z）胱氨酸 241.0 74.0 152.0
7.2.3标准曲线的绘制
吸取适量胱氨酸标准储备液（4.10）.用7.1所得的阴性样品上清液逐级稀释得到适合浓度的标准工作溶液.根据样液中被测化合物的含量情况，选定浓度相近的标准工作溶液，标准工作溶液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器的检测线性范围内.
7.2.4定性测定
按照液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和标准工作溶液，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间，与基质标准溶液的保留时间偏差在士2.5%之内：且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度 接近的基质混合标准工作溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物.
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10允许的最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50
7.2.5定量测定
在仅器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标，基质混合工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量.氨酸的标准溶液多反应监测色谱 图参见附录B，胱氨酸的参考保留时间为3.26min.
7.2.6空白实验
除不加试样外，均按上述测定条件和步骤进行.
8结果计算与表述
采用外标法定量，按照式（1）计算样品中胱氨酸含量.计算结果需扣除空白值，并保留两位有效数字.
式中：
X一试样中待测组分含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）：
