中华人民共和国出入境检验检疫行业标准
SN/T 1182. 1-2003
Detection antibodies against avian inftuenza virus- Procotol of agar gel immuno-diffusion test
中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布
前言
本标准根据 OE/Chapter 2. 1. 14 4th edition.2000 (诊断方拉和疫苗标准手量)Mabual of stand-ands for dngotic tests snd sccines)起章
本标准的附录A为资料性附录.本标塞由国家认证认可监督管理委员金提出并归口. 本标票由中事人民共和国珠海出人境检验检疫局负贵起章，本标雍主要起章人潘文技、景山，徐海、廖秀云. 本都准系首次发布的检检检疫行业标准，
禽流露抗体检测方法琼脂免疫扩散试验
1范图
本标星规定了驾流感建指免统扩散试验操作规程.
本标靠通用于检测禽类血源中显否含有高流感（A1）病要抗体.主要造用于黄类高流感检疫，疫监测和筑行病学调查，
2规观性引用文件
下判文件中的条款通过本标准的引用民成为本易准的兼款.凡是注目期的引用文件，其猫后是否可使用这些文得的最和级本，凡是不性目期的张用文行，其量新本运用于本标度.
3原理
非度区域扩教时质受阻力硬小，湿本上望自由扩散那式，由于不网航原分子的分子量，结构、形状和电 杭原和机体的分子量一般群在20万道尔顿以下-抗系及其特异性抗体在凝放中系高体度区城向低荷量不网，器此其扩散系数不网，查凝胶中的扩散速度这就不间，端抗原与相应抗体组扩能后在凝胶中 推遇，形底抗原抗体复合物署润者在相遇此比例运当，则形或最大的复合物，由于复合物的分子量增大，颗松增大，国面不再是模扩款育产生沉奖，量现出域状减带状，其形成的或状或带状被称为免疫抗案 线成免疫沉院审，器此，可数据忧原与被检盘调之民免否出碳试究线求判定横检自清中是香容在特屏查抗体.
4材料准业
4. 1 试列:磷数二氢钠(NeH PO - 2H;O) 质酸氢二钠(NsHPO 12H O) 氨化销（NsC1) 叠案 家错糖均方分界纯.
4.2称脂矿散试验抗原.标准阳性盒清：血指定单位供应.按说明书使用.
4.3都材.吸管，量览，平鼠（院赖为90mm×15mm） 三角航、外约5mm业属打孔器、优量移糖器和孩量发头，我那灯等.
4.4被检血清，按靠规方进乐血分高血请.它无缩盒，无细图污染.保存于4、
5操作方法
5.1试偿用水
本标塞新用水应符会GB/T66821992中三级水（三幕水>的规情要求.
5.2 对脂的制备
5.2.1班瘤溶波的配制参附录A
5.2.2制板传地腺溶锁自然冷都至约56时，将直植为90mm浩净灭菌的平区置于水手平台上，每 个平公加15mL，使炭较等实达2mm~3mm，加置平温特自然冷凝提后.将平二例置盒中，4T
SN/T 1182.12003
冰箱密时备用，
5.3打孔
孔中的琼期用针头轻轻统生现吸出，勿伤边维，以免涉漏，加热封底（一次性树滑平国除外）. 反应孔现用现灯，从冰箱内取定琼脂板-按图1或图2打孔.孔径约5mm，孔距2mm~5mm，将
度 1
2
5.4加样
用微量移锁器吸取抗原基液加人G孔，期性对限分别加人孔中-受检血清按顺序分别加人其余各孔中，每孔均以如请不货出力度，想加一个带品应换一个演头，
5.5反应
24 h、48 h.72h 现服井记录结. 雄样究毕后-B止 10 min.将平里例置-款人湿盒于室疆 22°℃~25℃下细育 48 h~72 h.分别
6集判定
6.1将球脂板置属色背景下观察标港阳性血清与抗原孔之两出现一条清唯款密的白色沉提线，则试我成立，西期视为元筑，需重夏试试症，
6.2若被检血清孔与中心批原之闲出现沉淀线，并与标准阳维血清的沉提线末端平滑相连候（如图1示1号机），南被检盘提判为用性.
6.3被检血清与中心杭原礼之网属不出现沉提线-但标准阳性血领的沉能线一明弯向被检血消孔（如
6.4妇接验血清孔与中心批原孔之闻不出观况健线瓦标准脂性血清风胞线直肉被橙血滑孔我向其务何编弯者（知图1所示2号礼），则被检血清判为明性，
6.5被检盘清礼与中心抗原孔之间况能线与标准阳性业调与抗原礼之同的润线交叉（如图1所示4号孔）则判为非特异性反疫应重置该试验.著仍出现非特异性区应则判为用性.
（资料性附量） 附录A
A. 1pl7. 2 0.01 ml/L PB 胎别鲁
水 1 000 mL 1.56 g水 1 000 mL 3.585 g
流：磷二氧情（NH，PO2HO）乙减：类B复二镇(Ns HPO 12H O)
兼甲2.二源充分溶解后-分别保存，用时取甲液28mL.乙72=1.理合即成.
A.2斯溶的制备
0.9 6赛化钠（NaC1) 8.0 E 0.1
pH7 2 0.01 mol/L PB定潜至 100 mL~高压 105 KPa15 min 成300C水历素沸亚完全治解
